Жёсткая обработка посевного материала уничтожает слабокислотоустойчивые микобактерии, нокардиоформные актиномицеты (родококки, нокардии) и коринебактерии, которые нередко являются причиной положительных туберкулиновых реакций у сельскохозяйственных животных.
Ранее А.Л. Лазовской с соавторами был предложен способ бактериологического выявления нокардиоформных актиномицетов, включающий предпосевную обработку патологического материала водным раствором препарата «Лесептик» [4, 5, с.19-21]. В связи с прекращением изготовления данного препарата и с недостатками существующих методов предпосевной обработки материала перед нами встала задача по разработке метода деконтаминации патологического материала от положительно реагирующих на туберкулин сельскохозяйственных животных для выявления нокардиоформных актиномицетов и коринебактерий.
Для разработки метода деконтаминации использовали материал от лабораторных животных (беспородных белых мышей живой массой 18-20 г), заражали однократно внутрибрюшинным введением суспензии 2- суточной культуры R. equi в дозе 0,2 мл, содержащей 30х106 КОЕ. На 8 день опыта проводили эвтаназию мышей в соответствии с методическими рекомендациями «Лабораторная диагностика туберкулеза» [1, с.24].
В ходе опытов отрабатывали метод предпосевной обработки материала от мышей средством «Септустин» в сравнении с традиционным методом А.П.Аликаевой и аналогом для выявления нокардиоформных актиномицетов – 0,5% раствором Лесептика в экспозиции 3 часа.
Средство «Септустин» (изготовитель ООО «Уралстинол Био», Россия) [3, с.5] испытывался в форме водных растворов от 0,1% до 0,5% концентрации с экспозициями от 15 до 180 минут.
Внутренние органы мышей заливали в соотношении 1:2 водным раствором средства «Септустин» (экспозиции и концентрации выбирались опытным путём).
По окончании экспозиции деконтаминантов органы мышей подвергали двукратному отмыванию физиологическим раствором с последующим приготовлением из них суспензий для посевов на среду Левенштейна-Йенсена (по 10 пробирок от каждой мыши). Посевы инкубировали в термостате при температуре + 37 0С.
Оценку антимикробного действия средства «Септустин» проводили по количеству колоний родококков, выросших при посеве суспензии органов на среду Левенштейна-Йенсена, с учётом концентрации и экспозиции препарата.
На основании данных, полученных in vitro[2, с.65-66], 0,1% раствор средства «Септустин» оказывал бактерицидное действие на условно-патогенную микрофлору при экспозиции 30 минут. При этой концентрации и экспозиции рост родококков не изменялся, поэтому данный вариант обработки является начальным для выделения родококков из патологического материала от мышей.
Результаты исследований по обработке патологического материала от мышей представлены в таблице 1.
Из данных таблицы 1 видно, что в посевах от мышей (обработка раствором средства «Септустин» в концентрации 0,1% с экспозициями 30, 60 и 120 минут) наблюдался сплошной рост родококков. При обработке материала 0,1 % раствором средства «Септустин» в экспозиции 180 минут рост родоккоков на среде Левенштейна-Йенсена составил в среднем 65 колоний на одну пробирку.
Таблица 1
Сравнительная эффективность предпосевной обработки патологического материала от белых мышей (R.equi)
| Показатели |
Средство «Септустин» |
0,5% -180 м.
р-р Лесептика |
М-д А.П.Аликаевой | ||||||||||
| 0,1%-30 м. | 0,1%-60 м. | 0,1%-120 м. | 0,1%-180 м. | 0,25%-15 м. | 0,25%-30 м. | 0,25%-60 м. | 0,25%-120 м. | 0,25%-180 м. | 0, 5%-15 м. | 0,5%-30 м. | |||
| Среднее кол-во колоний на 1 пробирку |
+ |
+ |
+ |
65 |
15 |
8 |
5 |
2 |
1 |
1 |
– |
62 |
– |
| Рост,
сутки |
1 |
1 |
1
|
1 |
1 |
1 |
2 |
2 |
5 |
5 |
– |
1 |
– |
| Примечание: «+»–сплошной рост, «–»–рост отсутствует | |||||||||||||
Данное количество колоний является считываемым и аналогичным обработке материала 0,5% раствором Лесептика в экспозиции 3 часа. В посевах от мышей при обработке 0,25 % раствором в экспозициях15 и 30 минут были единичные колонии, а при обработке 0,25 % раствором в экспозиции от 60 до 180 минут и 0,5 % раствором в экспозиции 15 минут наблюдалась задержка роста родококков от 2 до 5 дней, что осложняла проведение опытов in vivo.
Бактерицидное действие на родококки в патологическом материале от мышей оказывал 6% раствор серной кислоты.
Таким образом, оптимальным (соответствующим аналогу − 0,5% раствор Лесептика в экспозиции 3 часа) вариантом обработки материала от мышей является 0,1% концентрация средства «Септустин» в экспозиции 3 часа для выделения родококков; для элиминации родококков – 0,5% раствор в экспозиции 30 минут.
Разработан метод предпосевной обработки 0,1% раствором средства «Септустин» с экспозицией 3 часа патологического материала от мышей, заражённых культурой Rhodococcus equi, который позволяет выделять в посевах считываемое количество родококков, что обеспечивает достоверность проводимых опытов in vivo.
Впервые установлены оптимальные параметры предпосевной обработки патологического материала от мышей средством «Септустин», которые могут применяться для изучения антагонистической активности пробиотических препаратов по отношению к родококкам in vivo и выделения их из патологического материала сельскохозяйственных животных.
Список литературы:
- Лабораторная диагностика туберкулеза: Методические рекомендации. – Омск.– 1988. – 30с.
- Лискова Е.А., Слинина К.Н. Антимикробная активность Септустина in vitro в отношении микроорганизмов III и IV групп патогенности/ Е.А. Лискова, К.Н. Слинина К.Н. //Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии.-Санкт-Петербург — 2014, №2.- С. 65-66.
- Наставление по применению препарата «Септустин» для дезинфекции объектов ветнадзора. Уралстинол.- БИО. – 2002. – 28с.
- Пат. РФ 2321636С1 Способ бактериологического выявления нокардиоформных актиномицетов/К.Н.Слинина [и др.]; опубл.10.04.2008.
- Слинина К.Н. Новый способ деконтаминации образцов патологического материала от животных положительно реагирующих на туберкулин / К.Н. Слинина // Ветеринарная практика.– Санкт-Петербург, № 1, 2007. – С. 19–21.[schema type=»book» name=»МЕТОД ДЕКОНТАМИНАЦИИ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ОТ МЫШЕЙ, ЗАРАЖЁННЫХ RHODOCOCCUS EQUI» description=»Разработан метод предпосевной обработки патологического материала от мышей, заражённых культурой Rhodococcus equi. При этом установлено, что обработка патологического материала 0,1% раствором средства «Септустин» с экспозицией 3 часа позволяет выделять в посевах считываемое количество родококков, что обеспечивает достоверность проводимых опытов in vivo. » author=»Лискова Елена Афанасьевна, Слинина Клавдия Николаевна» publisher=»БАСАРАНОВИЧ ЕКАТЕРИНА» pubdate=»2017-03-14″ edition=»ЕВРАЗИЙСКИЙ СОЮЗ УЧЕНЫХ_30.05.2015_05(14)» ebook=»yes» ]