Белки в любых биологических объектах являются основными материальными агентами, определяющими функционирование организма.
Исследованию белкового состава отдельных видов растений в настоящее время уделяется большое внимание. Это объясняется тем, что информация о содержании общего количества белка и, особенно, фракционного состава дает возможность решения таксономических проблем. Белки, являясь первичными продуктами экспрессии генов, отражают генетическую структуру организма, и с успехом используется в решении разнообразных задач прикладной ботаники и систематики. Белки растительной клетки обладают необходимыми для сравнительного исследования высокой гетерогенностью и вариабельностью [2].
Горец почечуйный (почечуйная трава) является фармакопейным растением и применяется в традиционной и народной медицине. Данное обстоятельство обусловлено широким спектром фармакологической активности. Препараты на основе сырья почечуйной травы обладают диуретическим, кровоостанавливающим, обезболивающим и противовоспалительным действием [3].
Выраженность фармакологического действия лекарственного растительного сырья напрямую связана с содержанием биологически активных веществ в заготовленном сырье. Количество биологически активных соединений в сырье может значительно варьировать в зависимости от стадии вегетации лекарственного растения. Оптимальной фазой для заготовки сырья горцев является стадия цветения, так как в этот период сырье содержит наибольше количество действующих фармакологически активных соединений (флавоноидов). Если лекарственное растительное сырье будет собрано на более ранней стадии вегетации (бутонизация и ранее) или более поздней (плодоношение и позже), то сырье не будет содержать необходимого количества биологически активных соединений, определяющих фармакологическую активность самого сырья и препаратов на его основе [3].
В настоящее время, в соответствии с действующей нормативной документацией на лекарственное растительное сырье горца почечуйного (Государственная Фармакопея XI издания, статья 58) должно собираться в фазу цветения [3].
Определение фазы цветения нормативно-технической документацией не предусмотрено. Имеющийся раздел «Внешние признаки» в фармакопейной статье на горец предусматривает определение и доказательство самого вида растения, нежели нужной фазы вегетации.
Целью настоящего исследования является разработка способа определения фазы цветения лекарственного растения горца почечуйного.
В исследовании использовались образцы свежезаготовленного лекарственного растительного сырья горца почечуйного, собранные на территории Самарской области в разные фазы вегетации.
Определение фракционного состава белков проводили с помощью фармакопейного метода электрофореза в 7,5% полиакриламидном геле с последующей идентификацией белковых фракций с помощью реактива амидо черный 10Б [4].
Для определения молекулярной массы белковых фракций использовали электрофоретическое разделение в присутствии додецилсульфата натрия. Данный способ позволяет снизить до минимума влияние зарядов белков на их подвижность. Под действием натрия додецилсульфата третичная и вторичная структуры белков разрушаются, и скорость миграции белковых фракций в электрическом поле зависит только от собственных молекулярных масс белков [4].
Для построения градуировочного графика зависимости «молекулярная масса — относительная электрофоретическая подвижность (ОЭП)» при определении молекулярных масс белковых фракций использовали белки-стандарты тропонин С (18 000 Да), тропонин I (24 000 Да), тропонин Т (38 000 Да), яичный альбумин (42 000 Да) и бычий сывороточный альбумин (68 000 Да).
В результате, на разных фазах вегетации растения было обнаружено различное количество фракций неспецифических белков (НБ), с соответствующими величинами ОЭП.
Для сырья горца почечуйного, до цветения и на стадии цветения характерно наличие по одной фракции НБ, но с разными значениями ОЭП. После цветения в горце почечуйном возможно обнаружение трех фракций НБ со специфичными значениями ОЭП и молекулярными массами (Таблица).
Таблица
Фракционный состав белков в сырье горца почечуйного в различные периоды вегетации
| Название растений | Фаза вегетации лекарственных растений | ||||||||
| До цветения | Цветение | После цветения | |||||||
| ОЭП,
(M±m) |
Фракции белков | М, кДа | ОЭП,
(M±m) |
Фракции белков | М, кДа | ОЭП,
(M±m) |
Фракции белков | М, кДа | |
| Горец почечуйный | 0,75±0,02 | НБ | 10-15 | 0,78±0,02 | НБ | 10-15 | 0,10±0,01
0,50±0,01 0,73±0,02 |
НБ
НБ НБ |
90-95
55-60 15-20 |
Выводы
Таким образом, проделанная работа позволяет сделать следующие выводы:
- В траве горца почечуйного определен фракционный состав и молекулярная масса неспецифических белков для обнаруженных фракций на разных стадиях вегетации (до цветения, на этапе цветения, после цветения);
- Фракционный состав белков горца почечуйного имеет видовую специфичность и отличается в разные периоды физиологического развития;
- Для установления фазы цветения собранного лекарственного растительного сырья горца почечуйного можно использовать метод электрофореза в 7,5% полиакриамидном геле.
Список литературы
- Волончук, С. К. Энергосберегающие технологии переработки растительного сырья / С. К. Волончук, А. Н. Сапожников, Л. П. Шорникова // Ползуновский вестник. – 2011. — №2/1. – С. 166 – 171.
- Куркина А.В. Флавоноиды фармакопейных растений: Монография. – Самара: ООО «Офорт», ГОУ ВПО «СамГМУ Росздрава». — 2012. — 262 с.
- Лекарственные растения Государственной Фармакопеи. Фармакогнозия / В.А. Ермакова; под ред. И,А. Самылиной, В.А. Северцева. – М.: АНМИ, 2003. – 534 с.
- Стручкова, И.В. Теоретические и практические основы проведения электрофореза белков в полиакриламидном геле: Электронное учебно-методическое пособие / И. В. Стручкова, Т. А. Кальясова. — Нижний Новгород. – 2012.
- Юдина, Р. С. Генетика и феногенетика малатдегидрогеназы растений / Р. С. Юдина // Вестник ВОГиС. – 2010. – Т. 14, № 2. – С. 243 – 254.[schema type=»book» name=»РАЗРАБОТКА СПОСОБА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФАЗЫ ЦВЕТЕНИЯ СЫРЬЯ ГОРЦА ПОЧЕЧУЙНОГО» description=»В данной статье приводятся данные по изучению фракционного состава неспецифических белков на разных фазах вегетации сырья растения горца почечуйного методом электрофореза в 7,5% полиакриламидном геле.» author=»Редкокашин Дмитрий Евгеньевич» publisher=»Басаранович Екатерина» pubdate=»2016-12-13″ edition=»Басаранович Екатерина» ebook=»yes» ]