Одной из центральных проблем физиологии являются антропогенные токсиканты, которые способны вызывать не только функциональные, но и структурные повреждения. В связи с ухудшением экологической обстановки в Астраханской области, патологические состояния различных органов и систем, изменения реологических свойств кровистали отличаться высокой распространенностью и частота их встречаемости неуклонно растет.
Изучение механизмов повышения устойчивости различных органов и систем, а также плазмы крови к воздействию повреждающих факторов, в частности к воздействию серосодержащих поллютантов является актуальной задачей как теоретической, так и практической медицины.
Центральное место при катаболических и анаболических превращениях занимают окислительно-восстановительные реакции, которые участвуют не только в образовании энергии, необходимой для жизнедеятельности организма, синтезе структурных элементов тканей [7, 10], но и в процессах, приводящих к гибели клеток. Активация перекисного окисления липидов приводит к искажению информации от внеклеточных регуляторов к внутриклеточным эффекторным системам, к нарушению адаптационных способностей клеток микроциркуляторного русла [2, 3].
Окислительно-восстановительные процессы – увеличивают количество активных форм кислорода и радикальных соединений, обладающих высокой реакционной способностью и активно включающихся в процессы жизнедеятельности клеток на любой стадии ее развития – от созревания до гибели [4]. Возникший дисбаланс между про- и антиокислительными системами приводит к накоплению продуктов окисления основных классов макромолекул, включая липиды, белки и нуклеиновые кислоты, в результате чего в клетке может развиваться патологический (деструктивный процесс, получивший в литературе название окислительного стресса [1, 3].
Исходя из вышеизложенного, целью нашего исследования явилось изучение особенностей возрастной динамики уровня свободно-радикальных процессов в плазме крыс – самцов на различных этапах онтогенеза в норме и при хроническом воздействии серосодержащего природного газа Астраханского газоконденсатного месторождения (АГКМ).
Материалы и методы исследования. Объектом исследования служили самцы беспородных белых крыс, которых содержали в условиях вивария при свободном доступе к пище и воде. Интактные и экспериментальные животные были разделены на три группы по возрастному признаку: 1 группа: молодые – от 15 дней до 1 месяца, 2 группа: половозрелые – 6 – ти месячного возраста, 3 группа: старые – 1-2 лет жизни.
Экспериментальные животные подвергались воздействию природного газа АГКМ, содержащего сероводород в концентрации 90 ±4 мг/м3 в течение 6 недель по 4 часа в день (понедельник – пятница). Концентрация сероводорода в затравочной камере производства Московского института профзаболеваний и гигиены труда им. Эрисмана измерялась индикаторными трубками фирмы «Auer» — Berlin (West). Все возрастные группы экспериментальных животных в течении 6 недель получали внутримышечно 0,01мг тималина из расчета на 100г массы тела.
Интактные животные находились также по 4 часа в герметически закрытой затравочной камере, что и опытные, но без присутствия серосодержащего газа. После наркотизации животных этаминалом натрия (внутрибрюшинно в дозе 5 мг на 100г массы тела) производили декапитацию. Процесс перекисного окисления липидов индуцировали добавлением в среду аскорбиновой кислоты и ионов железа (ΙΙ). Перекисное окисление липидов основано на взаимодействии одного из конечных продуктов пероксидации липидов – малонового диальдегида (МДА) – с тиобарбитуровой кислотой с образованием окрашенного триметинового комплекса, имеющий максимум поглощения при длине волны 530-532 нм [5, 8, 10]. Спектрофотометрические исследования проводили на спектрофотометре Baekman (США). Определялись следующие показатели свободнорадикальных процессов: исходное перекисное окисление липидов (ПОЛ) по уровню содержания малонового диальдегида (МДА) в нмоль/0,05 г сырого веса ткани, а скорость спонтанного (сп. ПОЛ) и аскорбатзависимого (Аск.ПОЛ) в нмоль образовавшегося МДА в пробе за 1 час инкубации [6]. Материалы исследования были обработаны статистически с использованием компьютерной программы MicrosoftExcel. Достоверность различий двух средних величин определяли с помощью критерия t Стьюдента.
Результаты исследования. У интактных животных в плазме крови обращает на себя внимание тот факт, что содержание продуктов, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой ниже в молодом возрасте и составляет 1,86±0,02 мкмоль/мг (Р<0,05), у половозрелых 1,13±0,023 мкмоль/мг (Р<0,05), значимо выше у старых животных достигает 2,01±0,06 мкмоль/мг (Р<0,05). Отмечается усиление скорости Аск. ПОЛ (Р<0,05) у молодых крыс по сравнению со старыми: с 69,32±3,4 до 82,58±0,88 нмоль/ч, а так же снижение уровня сп. ПОЛ: с 25,17±1,00 до 19,15±0,20 нмоль/ч. Окислительная модификация белков у молодых животных составила 1,14±0,05 ед/мг белка, а у старых произошло снижение до 0,86±0,46 ед/мг белка.
При хроническом воздействии серосодержащего природного газа АГКМ интенсивность свободнорадикальных процессов и уровень антиоксидантной защиты в плазме крови свидетельствует о возрастных особенностях функционирования организма в ответ на действие токсиканта. Так, при сравнении показателей пероксидации липидов установлено, что содержание продуктов, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой с возрастом увеличивается до 3,71±0,59 мкмоль/мг (Р<0,05). Усиление скорости Аск. ПОЛ (Р<0,05) отмечается у молодых животных по сравнению со старыми: с 82,58±0,88 нмоль/ч до 117,15±2,629 нмоль/ч, но обнаружено снижение сп. ПОЛ: с 38,18±1,38 до 34,89±0,51 нмоль/ч.
Окислительная модификация белков у молодых животных достоверно снизилась и составила 0,61±0,04 ед/мг белка, а у старых произошло увеличение показателей до 1,23±0,05 ед/мг белка.
Таким образом, результаты нашего исследования показывают, что наибольшие изменения в показателях перекисного окисления липидов наблюдаются в плазме крыс молодого возраста. Результаты изучения уровня интенсивности окислительной модификации белков показали, что уровень скорости деструкции белков в плазме крови выше у старых животных, что согласуется с литературными данными [11] и свидетельствует о том, что старение сопровождается разнонаправленными изменениями активностей ферментов, позволяющим на новом функциональном уровне поддерживать физиологические процессы. Во всех эекспериментальных группах после введения тималина отмечена тенденция к снижению изучаемых показателей к контрольным значениям. То есть тималин в данном случае оказывает моделирующее действие.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
- Барабой, В.А. Перекисное окисление и стресс / В.А. Барабой, И.И. Брехман, В.Г. Голожин с соавт. — М.: Наука, 2004. — 148 с.
- Владимиров, Ю.А. Свободно-радикальное окисление липидов и физические свойства липидного слоя биологических мембран /Ю.А.Владимиров // Биофизика. -1987. — Т.32, № 5. — С. 830-844.
- Владимиров, Ю.А. Свободные радикалы в живых системах / Ю.А. Владимиров, О.А. Азизова, А.И. Деев с соавт. // Итоги науки и техники, 2000. – Т. 29. — С. 151-167.
- Дубинина, Е.Е. Свободно-радикальные процессы при старении, нейрдегенеративных заболеваниях и других патологических состояниях /Е.Е. Дубинина, А.В. Пустыгина //Биомедицинская химия. – 2007. — №4. – С. 351-371
- Мажитова, М.В. Свободнорадикальные процессы и антиоксидантная защита разных отделов центральной нервной системы на этапах постнатального онтогенеза белых крыс в норме и при действии промышленных серосодержащих поллютантов //Автореф. дисс. д.б.н. – Астрахань. – 2012. –44 с.
- Стальная, И. Д. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты / И. Д. Стальная, Т. Т. Гаришвили // Современные методы в биохимии. – М.: Медицина – 1977. – С. 66–68.
- Стефани, Д.В. Клеточные мембраны при иммунном ответе /Д.В.Стефани, И.И.Зернов // Проблемы мембранной патологии в педиатрии. — М: Медицина — 1984. — С.151-161.
- Теплый, Д.Л.Особенности морфологической картины сыворотки крови мышей разных возрастных групп при экспериментальном стрессе /Теплый Д.Л., Аюпова Н.А. //Естественные науки: Журнал фундаментальных и прикладных исследований. — 2005. — №.10.- С.47-50.
- Хавинсон, В.Х. Свободно-радикальное окисление и старение /В.Х. Хавинсон, В. А. Баринов, А. В. Арутюнян, В. В. Малинин. – СПб.: Наука, 2003. – 355 с.
- Ohkawa, H., Ohishi N., Yagi K. Assay for lipid peroxides in animal tissues by thiobarbituric acid reaction. Anal. Biochem. 1979, 95(2), P.351-358
- Rao, G. Effect of age on the expression of antioxidant enzymes in maile Fischer 344 rats /G. Rao, E. Xia, A. Richardson //Mech. Ageing and Dev. – 1990. – Vol. 53, № – P. 49-60[schema type=»book» name=»ВОЗРАСТНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ПОКАЗАТЕЛЕЙСВОБОДНОРАДИКАЛЬНЫХ ПРОЦЕССОВ ПЛАЗМЫ КРОВИ КРЫС В УСЛОВИЯХ ХРОНИЧЕСКОЙ ИНТОКСИКАЦИИ» description=»Цель. Исследовано состояние свободно-радикальных процессов вплазме крови крыс при хронической интоксикации в онтогенезе. Метод. Спектрофотометрические исследования проводили на спектрофотометре Baekman (США). Материалы исследования были обработаны статистически с использованием компьютерной программы MicrosoftExcel. Достоверность различий двух средних величин определяли с помощью критерия t Стьюдента. Результат. В ходе проведенного эксперимента выявлена возрастная динамика уровня свободно-радикальных процессов в плазме крови крыс – самцов на различных этапах онтогенеза, выявлены различия скорости перекисного окисления липидов и окислительной модификации белков. Проведено сравнение активности состояния антиоксидантной защиты плазмы крови в онтогенетическом аспекте. Вывод. Наиболее интенсивно процессы перекисного окисления липидов и белков протекают в молодом возрасте. В условиях эксперимента установлен более высокий уровень антиокислительной активности плазмы крови у молодых и старых крыс, в сравнении с группой половозрелых животных.» author=»Рожкова Ирина Семеновна» publisher=»БАСАРАНОВИЧ ЕКАТЕРИНА» pubdate=»2017-03-14″ edition=»ЕВРАЗИЙСКИЙ СОЮЗ УЧЕНЫХ_30.05.2015_05(14)» ebook=»yes» ]