На сегодняшний день вопрос терапии при остеоартрозах у животных стоит весьма остро. Известны группы препаратов, которые рекомендованы для лечения при данном заболевании [5, с. 9-15; 6, с. 76-81; 8, с. 11-13]. Но их эффективность в аспекте восстановления пораженного хряща весьма сомнительна, а побочные эффекты слишком сильны, что весьма ограничивает применение этих препаратов [7, с. 26-27]. Поиск нового метода лечения, не обладающего токсическими, аллергическими побочными эффектами остается весьма актуальным. Данную проблему может решить применение обогащенной тромбоцитами аутоплазмы. Обогащенная тромбоцитами плазма – это небольшое количество аутоплазмы с концентрацией тромбоцитов более 1 млн/мкл. Содержащиеся в гранулах тромбоцитов факторы роста (инсулиноподобный, бета-трансформирующий, эпидермальный, тромбоцитарный) оказывают высокий стимулирующий эффект на ткани органов. Плазма аутологична, не вызывает аллергических реакций, обладает противовоспалительным и анальгезирующим эффектом, способствует репарации поврежденных тканей [3, с. 6-12]. При этом известно о положительных результатах применения обогащенной тромбоцитами аутоплазмы в ветеринарной офтальмологии [4, с. 112-114] .
Цель настоящего исследования – выявить клинико-биохимические изменения в крови у животных при лечении больных остеоартрозом собак обогащенной тромбоцитами аутоплазмой.
Задачи исследования:
— определить клиническую эффективность терапии плазмой, обогащенной тромбоциатами при остеоартрозах
— определить динамику гематологических и биохимических изменений в крови при терапии плазмой, обогащенной тромбоцитами.
Методы исследования: клинический, рентгенографический, гематологический, биохимический, статистический.
Работа проводилась на базе кафедры «Паразитология,эпизоотология и ВСЭ» «Саратовского ГАУ им. Н.И.Вавилова» и Ветеринарной клиники доктора Анникова (г. Саратов). Предметом исследования явилась обогащенная тромбоцитами плазма, полученная по оригинальной методике. Объектом исследования явились клинически больные животные (собаки) с диагнозом остеоартроз коленного сустава (n=54). Возраст животных от 2 до 8 лет, живая масса от 5 до 40 кг. Животные были разделены на две группы по принципу аналогов. Животным опытной группы в качестве терапии интраартикулярно вводили обогащенную тромбоцитами аутоплазму в дозе 0,5 мл 3-5 раз с интервалом 7 дней. Животным контрольной группы внутривенно вводили препарат «Бонхарен» в дозе в дозе 0,05 мл/кг массы тела согласно официально утвержденной инструкции.
Материалом для исследования в ходе работы послужили пробы крови и рентгенограммы пораженных суставов.
Клиническое исследование выполняли общепринятыми в ветеринарии методами [2, с. 306]. Гематологическое исследование выполняли на автоматическом гематологическом анализаторе Mindray ВС-2300 , биохимическое – на полуавтоматическом анализаторе Sinnova BS-3000P. Рентгенографическое исследование выполняли на цифровом рентгенографическом комплексе «Вател-1»
Результаты собственных исследований.
При клиническом осмотре животных с остеоартрозом коленного сустава отмечали хромоту опирающего или висячего типа. Иногда характер хромоты носил смешанный тип, или она возникала после нагрузок. Сустав, как правило, был не увеличен в размере, местная температура не повышена.
В нашем исследовании участвовали животные с 1 — 4 стадиями остеоартроза. Остеоартроз первой стадии у животных чаще всего сопровождала хромота опирающего типа после нагрузок, редко — в спокойном состоянии. На данном этапе отсутствовала крепитация, болезненность не была выражена. Атрофия мускулатуры отсутствовала.
При остеоартрозе второй стадии чаще всего к клинической картине добавляется болевой синдром, развивается тугоподвижность, может присутствовать крепитация. Животное, испытывающее боль, начинает оберегать конечность, скелетная мускулатура начинает атрофироваться.
При переходе остеоартроза в третью и четвертую стадии клинические признаки усугубляются: прогрессирует хромота, атрофия скелетной мускулатуры. Появившиеся в суставе остеофиты и хондромные тела обуславливают сильную болезненность и крепитацию.
На рентгенограммах коленного сустава до лечения отмечались классические признаки остеоартроза: склероз субхондрального слоя кости, неравномерное сужение суставной щели, затемнение суставной щели, краевые остеофиты.
Процедуру интраартикулярного введения аутоплазмы проводили без релаксации, в положении животного лежа на боку, так, чтобы пунктируемый сустав был параллельно поверхности стола. Артроцентез проводили с соблюдением правил асептики и антисептики общепринятыми в ветеринарии методами. В пораженный сустав вводили от 0,5 до 0,7 мл аутоплазмы.
После первой процедуры интраартикулярного введения аутоплазмы на следующий день иногда наблюдалось ухудшение, усиливалась хромота. Это, вероятно, связано с созданием повышенного давления в полости сустава из-за введенной аутоплазмы. Данный побочный эффект был быстропроходящим. Через неделю после первого введения плазмы в сустав у животных с остеоартрозом первой стадии наблюдалась ярко выраженная положительная динамика, выражающаяся в практически полном отсутствии хромоты, увеличении активности животных. У животных контрольной группы, которым внутривенно вводили «Бонхарен», также уменьшилась хромота, однако эффект был не столь ярко выражен.
Положительная динамика отмечалась и у животных опытной группы с остеоартрозом второй степени. Незначительно уменьшилась хромота, болезненность сохранялась. Данная тенденция прослеживалась и у животных контрольной группы.
При остеоартрозе третей и четвертой стадий ввиду сильных деструктивных поражений хряща и субхондральной кости, положительного эффекта как у животных опытной, так и у собак контрольной группы после первой инъекции мы не наблюдали.
Кратность введения аутоплазмы у животных с остеоартрозом первой стадии составила 3 процедуры с интервалом 7 дней,, у животных с остеоартрозом второй стадии – 4, третей и четвертой стадий – 5 процедур.
К концу терапии у животных опытной группы с остеоартрозом первой и второй стадий исчезла полностью хромота и болезненность.
У животных с остеоартрозом третьей стадии хромота также пропала. Лишь у отдельных животных она возникала после длительных нагрузок. Также исчезла тугоподвижность сустава, болезненность и крепитация, практически полностью восстановился объем мышц.
Терапия животных с четвертой стадией остеоартроза показала положительный эффект. У данных пациентов пропала хромота, тугоподвижность и болезненность исчезли, восстановился объем мышц, сохранялась лишь незначительная крепитация, связанная с наличием остеофитов и хондромных тел в полости сустава. Животные стали более активны и подвижны.
Положительная динамика также присутствовала у животных контрольной группы. Введение «Бонхарена» при остеоартрозе первой и второй стадий показало хороший терапевтический эффект, однако оказалось малоэффективным при третьей и четвертой стадиях. Хромота стала меньше, болезненность и крепитация сохранялись, объем мускулатуры не восстановился. Активность животных увеличилась незначительно.
Мониторинг гомеостаза организма в процессе лечения проводили с помощью клинического и биохимического анализа крови (табл. 1, табл.2).
Таблица 1.
Динамика гематологических изменений крови у животных при терапии остеоартрозов обогащенной тромбоцитами плазмой ((n=54,* р≥0,05, ** р ≥ 0,01, *** р ≥0,001)
|
Показатель |
Норма | До лечения | 14 сутки | 30 сутки | |||
| опыт | контроль | опыт | контроль | опыт |
контроль |
||
| Гемоглобин, г/л | 115-180 | 156,50±8,76 | 139,1±5,87*** | 130,3±5,21 | 138,4±5,60** | 139,10±5,87) | 130,8±4,44** |
| Гематокрит,% | 37-54 | 42,60±1,17 | 43,90±1,41* | 44,30±2,31 | 41,30±1,55* | 42,70±2,40 | 37,80±4,71** |
| Эритроциты, млн/мкл | 5,5-8,5 | 6,26±0,22 | 6,36±0,46 * | 6,35±0,23 | 6,99±0,78 * | 6,83±0,17 | 6,57±0,17* |
| СОЭ, мм/ч | 0-22 | 7,7±1,28 | 8,6±0,73 ** | 5,9±1,21 | 5,90±1,03* | 8,0±1,15 | 5,8±0,96 ** |
| ЦП | 0,8-1,5 | 0,69±0,04 | 0,63±0,01* | 0,64±0,05 | 0,68±0,06* | 0,72±0,06 | 0,64±0,08* |
| Тромбоциты, тыс/мкл | 160-430 | 360±19,3 | 340±16,48 ** | 366,1±13,83 | 358,60±11,33 ** | 272,9
18,87 |
323,8±14,78*** |
| Лейкоциты, тыс/мкл | 6,0-17,0 | 13,29±0,83 | 10,15±0,57 ** | 11,13±1,26 | 10,13+0,88 * | 7,59±0,43 | 8,60±0,31 * |
| Эозинофилы | 2-10 | 2,6±0,5 | 2,1±0,6 * | 2,4±0,6 | 3,1±0,5 ** | 2,5±0,6 | 3,2±0,5 * |
| Базофилы | 0-1 | 0,60±,2 | 0,4±0,2 * | 0,7±0,1 | 0,8±0,1 * | 0,9±0,1 | 0,8±0,1* |
| Палочкоядерные нейтрофилы | 0-3 | 1,3±0,4 | 0,7±0,2 ** | 1,1±0,2 | 1,0±0,2 * | 1,0±0,3 | 1,2±0,3 * |
| Сегментоядерные нейтрофилы | 60-70 | 62,7±0,9 | 68,7±0,6*** | 67,1±2,8 | 62,7±1,1** | 67,0±1,8 | 64,6±1,4 ** |
| Моноциты | 3-10 | 4,2±0,8 | 3,7±0,9 * | 3,6±0,9 | 2,7±0,5 * | 2,7±0,7 | 3,7±0,7* |
| Лимфоциты | 12-30 | 29,7±1,2 | 25,6±1,3** | 24,6±1,3 | 28,6±0,9 * | 25,3±1,5 | 25,7±1,1 ** |
Из таблицы 1 видно, что уровень эритроцитов, гемоглобина и гематокрита до начала терапии у животных опытной и контрольной группы находится в пределах референтных величин. Это свидетельствует о том, что данная суставная патология не оказывает влияния на органы гемопоэза. На протяжении лечения данные показатели существенно не изменялись. Терапия остеоартроза плазмой, обогащенной тромбоцитами, не оказывает угнетающего действия на органы системы гемопоэза и не провоцирует аллергизацию организма.
Уровень СОЭ до начала терапии на всем ее протяжении существенно не менялся и не выходил за рамки референтных величин, что говорит об отсутствии воспалительных явлений в суставе, сопровождающихся общей реактивностью организма.
Лейкоциты до начала терапии находились в пределах физиологической нормы у животных опытной (13,29+0,83) и контрольной групп (10,15+0,57) . К концу терапии отмечена незначительная положительная динамика, проявляющаяся в снижении уровня лейкоцитов соответственно до 7,59+0,43 в опытной, и до 8,60+0,31 в контрольной группе, что свидетельствует об отсутствии воспалительных явлений в суставе на фоне терапии плазмой, обогащенной тромбоцитами.
Для оценки функционального состояния внутренних органов и для контроля терапии мы использовали биохимический анализ крови (табл.2). При этом оценивали уровень пигментов (билирубин), печеночных ферментов (аланинаминотрансфераза, аспартатаминотрансфераза,щелочная фосфатаза), холестерина, общего белка и его фракций (альбумин),глюкозы, показатели работы почек (креатинин,мочевина), а также мочевую кислоту.
Аланинаминотрансфераза и аспартатаминотрансфераза – это ферменты, преимущественно находящиеся в мышечной ткани сердца, скелетной мускулатуры и печени. Активность АЛТ возрастает при поражениях печени, а АСТ – при поражения сердца или мускулатуры. Из таблицы 2 видно, что до начала лечения и на всем его протяжении данные ферменты находятся в пределах физиологических норм.
Таблица 2.
Динамика биохимических изменений крови при терапии остеоартрозов обогащенной тромбоцитами плазмой (n=54,* р≥0,05, ** р ≥ 0,01, *** р ≥0,001)
|
Показатель |
Норма | До лечения | 14 сутки | 30 сутки | |||
| опыт | контроль | опыт | контроль | опыт |
контроль |
||
| АЛТ, u/l | 8,0-57,0 | 43,7±6,03 | 45,1±3,67 ** | 51,1±6,23 | 50,1±5,60 * | 47,5±6,33 | 52,4±4,34 *** |
| АСТ, u/l | 9,0-48,5 | 32,2±4,56 | 28,0±5,02 ** | 35,5±4,63 | 36,2±3,90 * | 27,6±5,25 | 34,6±3,71*** |
| Билирубин,мкмоль/л | 0,1-10,3 | 6,17±1,29 | 4,65±0,88 *** | 3,62±0,97 | 4,78±0,91 ** | 4,36±1,32 | 6,26±1,12 *** |
| Общий белок, г/л | 50,8-77,2 | 54,2±4,08 | 44,4±8,04 *** | 57,1±6,68 | 55,3±5,91 ** | 51,0±7,65 | 50,3±8,04* |
| Альбумин,г/л | 25,0-39,7 | 26,3±3,75 | 24,7±3,53 ** | 28,3±2,25 | 27,7±3,58 ** | 26,7±1,8 | 33,8±1,18 *** |
| Щелочная фосфатаза, u/l | 10,0-90,0 | 49,9±8,27 | 57,9±7,35*** | 67,0±4,90 | 63,6±4,35** | 59,6±5,34 | 47,2±6,29*** |
| Холестерин,ммоль/л | 2,0-6,9 | 5,19±0,72 | 4,89±0,64 ** | 5,79±0,59 | 5,37±0,60* | 6,57±0,48 | 5,92±0,62 * |
| Креатинин,мкмоль/л | 44,3-138,4 | 125,2±6,21 | 104,0±10,47 *** | 103,6±6,38 | 103,4±12,1 * | 96,7±6,83 | 105,2±8,27 *** |
| Мочевина,ммоль/л | 2,5-8,6 | 5,57±0,68 | 4,41±0,75** | 4,92±0,72 | 4,26±0,62* | 5,26±0,51 | 5,32±0,56* |
| Мочевая кислота,мкмоль/л | 29,6-83,0 | 52,54±5,99 | 59,77±6,58** | 54,25±6,29 | 70,23±4,02*** | 65,25±3,09 | 62,41±4,56** |
| Глюкоза,ммоль/л | 3,4-6,5 | 4,86±0,44 | 4,89±0,27* | 5,08±0,51 | 5,45±0,31* | 4,50±0,51 | 4,90±0,37* |
Фермент щелочная фосфатаза имеет свойство изменяться при патологиях костной системы, таких как остеодистрофии и остеопороз, а также при патологиях печени [1, с. 57]. В начале курса лечения его уровень у животных опытной группы составил 49,9±8,27 u/l, что говорит об отсутствии глубоких нарушений со стороны костной системы в области пораженных суставов. На момент окончания курса лечения уровень щелочной фосфатазы составил 59,6±5,34 u/l в опытной группе, что говорит об отсутствии ухудшений в костной системе, а также отсутствие токсического поражения печени.
Билирубин — основной пигмент, образующийся в селезенке и клетках ретикулоэндотелиальной системы после распада эритроцитов. Основная часть билирубина конъюгируется до нетоксичных соединений и выводится клетками печени. Повышение данного показателя возможно при гемолитической анемии, гепатитах, обструкциях желчевыводящих путей [1, с. 57]. На протяжении исследования данный показатель у животных опытной группы находился в норме, что свидетельствует о нормальной дезинтоксикационной функции печени в процессе терапии обогащенной тромбоцитами плазмы.
Основные показатели работы почек, такие как креатинин, мочевина и мочевая кислота находились в норме в течение всего периода исследования. Данный факт свидетельствует об отсутствии нарушений со стороны выделительной функции почек в процессе нашей терапии.
При проведении контрольной рентгенографии пораженных суставов также были отмечены положительные изменения, выражающиеся в снижении процента склероза суставных поверхностей, уменьшения плотности остеофитов.
Выводы. На основании выполненных клинических, гематологических, биохимических и рентгенографических исследований можно заключить следующее:
- Применение обогащенной тромбоцитами аутоплазмы интраатикулярно при терапии остеоартроза отличается от стандартных методов терапии высокой клинической эффективностью. Об этом свидетельствует повышение подвижности животных опытной группы, их активности в сравнении с животными контрольной группы, а также отсутствие местных воспалительных реакций в суставе.
- Уровень лейкоцитов и СОЭ, находящиеся в пределах референтных величин на всем протяжении исследования, а также отсутствие эозино- и базофилии подтверждают, что использование аутоплазмы интраатикулярно не сопровождается системными воспалительными и аллергическими реакциями.
- Интраатикулярное введение аутоплазмы не оказывает угнетающего действия на органы системы гемо-, лейко- и тромбопоэза, так как уровень эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов на протяжении лечения не выходил за рамки референтных величин.
- Терапия плазмой, обогащенной тромбоцитами, не оказывает системного гепато- и нефротоксического эффекта, так как уровень билирубина, печеночных ферментов, а также показателей работы почек не выходили за рамки референтных величин.
Неясными остаются изменения в синовиальной жидкости суставов при данной патологии, поскольку изменения в клеточном и физико-биохимическом составе этой жидкости являются маркерам процессов, происходящих в суставе. Этой проблеме будут посвящены дальнейшие наши исследования.
Список использованной литературы.
- Быкова, Н.Л. Оценка показателей крови у животных/Н.Л. Быкова [и др.].М.: «ИЦП Маска», – 57 с.
- Винников, Н.Т. Ветеринарная лабораторная диагностика/ Н.Т.Винников – Саратов: ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ».- 2003.-306 с.
- Дейкало, В.П. Обогащенная тромбоцитами плазма в лечении заболеваний и повреждений опорно-двигательного аппарата / В.П.Дейкало, А.Н.Мастыков, К.Б.Болобошко// Вестник ВГМУ, ТОМ 10.-2011.-№4.- С.6-12.
- Клинические результаты применения методы плазмы, обогащенной тромбоцитами (PRP-технологии) в ветеринарной офтальмологии/А.Г.Шилкин,Д.А.Ротанов,Т.Н.Павлова,К.А.Новикова//Труды Московского международного ветеринарного конгресса.-2013.-С.112-114.
- Кулешова, А.Я.Влияние препарата Хионат на формирование суставного хряща у собак/Я.А. Кулешова, М.М. Захарова, С.Г. Раденска-Лоповок//Российский ветеринарный журнал.Мелкие домашние животные. -2006.-№3.-С.9-15.
- Медикаментозное лечение остеоартроза (обзор литературы)/ С.В.Королева, С.Е.Львов,Э.В.Григорьев, С.Е.Мясоедова// Травматология и ортопедия России.-2006.-№ 3 (41).-С.76-81
- Пульняшенко, П.Р.Некоторые осложнения со стороны желудочно-кишечного тракта у мелких домашних животных при лечении болевого синдрома с использованием нестороидных противовоспалительных препаратов и глюкокортикоидов/Пульняшенко П.Р//Ветеринария Кубани.-2007. -№3. -С.26-27
- Сотников, В.В.Диагностика и лечение остеоартроза/ В.В.Сотников//Ветеринарный Петербург.-2014.-№1.-С 11-13.
- Якимчук, Е.А.Клинико-морфологическое обоснование эффективности применения кафорсена при лечении животных с переломами, асептическими артритами и артрозами : дисс…. канд.ветер.наук. Саратов.-2014.[schema type=»book» name=»КЛИНИКО-БИОХИМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В КРОВИ ЖИВОТНЫХ НА ФОНЕ ТЕРАПИИ ОСТЕОАТРОЗОВ ОБОГАЩЕННОЙ ТРОМБОЦИТАМИ АУТОПЛАЗМОЙ» author=»Анников Вячеслав Васильевич, Пигарева Юлия Вячеславовна, Клюкин Сергей Дмитриевич» publisher=»БАСАРАНОВИЧ ЕКАТЕРИНА» pubdate=»2017-06-01″ edition=»ЕВРАЗИЙСКИЙ СОЮЗ УЧЕНЫХ_ 30.12.2014_12(09)» ebook=»yes» ]