Введение. В настоящее время генная диагностика системы гемостаза все шире и шире используется для обследования пациентов с целью выявления факторов риска развития заболеваний и выработки тактики их профилактики [1]. Генетический полиморфизм в системе гемостаза не всегда имеет клинические проявления, в то же время продемонстрирована связь эпизодов венозного тромбоза с носительством врожденных факторов тромбогенного риска[2,3,4]. Отмечается, что мутации и полиморфизмы в системе гемостаза, ассоциирующиеся с повышенным риском возникновения тромбозов, встречаются у больных гемофилией с большей частотой по сравнению с общей популяцией [1].
Целью данного исследования являлось изучение распространенности полиморфизмов системы гемостаза как фактора тромбогенного риска в данной группе больных.
Материалы и методы. В исследовании приняли участие 48 пациентов, их них больных гемофилией А — 29 мужчин, 17 мужчин больных гемофилией В, 1 женщина больная гемофилией В, 1 женщина больная гемофилией С. Все больные состояли на диспансерном учете в поликлинике КГБУЗ «Алтайская краевая клиническая больница». Большинство больных страдали гемофилией тяжелой степени тяжести (73%), также встречались больные с легкой (11%) и средней (16%) степенью тяжести. Средний возраст больных составил 34,7 ± 6,7 года.
Всем больным гемофилией было проведено молекулярно-генетическое тестирование на выявление мутаций в генах системы гемостаза и системы фолатного цикла, которое выполнялось методом ПЦР и включало исследование полиморфизмов генов: фактора V (мутация FVLeiden G1691A), протромбина – FII(G20210 /A), метилентетрагидрофолатредуктазы – MTHFR (C677/T; A1298/C), метионин-синтазы редуктазы MTRR (A66/G), ингибитора активатора плазминогена — PAI-I (4G/5G), ITGA 2-гликопротеин (807 С/T), ITGB 3 –гликопротеин (1565 T/С), фактора I FGB (455G/A), фактора свертывания VII (10976 G/A), гена F13 (Val34Leu). Исследование проводилось на базе лаборатории клинической иммунологии и ВИЧ КГБУЗ «Алтайская краевая клиническая больница». Выделение ДНК производилось с помощью «ПРОБА-РАПИД-ГЕНЕТИКА», для амплификации использовались наборы реагентов «КардиоГенетика Тромбофилия» и «Генетика Метаболизма Фолатов», производство ООО «НПО ДНК- Технология», Россия. Исследования проводились на детектирующем амплификаторе «ДТ-96», (ООО «НПО ДНК- Технология», Россия), методом «кривых плавления».
Результаты и обсуждение. Данные о распространенности изучаемых генетических полиморфизмов в группе обследованных пациентов представлены в таблице 1.
Таблица 1.
Полиморфизмы системы гемостаза у больных гемофилией
| Тип полиморфизма системы гемостаза | Частота встречаемости полиморфизма у больных гемофилией | Частота встречаемости полиморфизма в европейской популяции | ||
| в гетерозиготном варианте | в гомозиготном варианте | Общая | ||
| Мутация FII гена протромбина | 0 | 0 | 0 | 2-3% |
| мутация FV Leiden | 3 (6,25%) | 0 | 6,25% | 4-6% |
| MTHFR (C677/T; A1298/C) | 20 (41,7%) | 11 (22,9%) | 64,6% | 60-75% |
| MTRR (A66/G) | 15 (31,25%) | 7 (14,6%) | 45,75% | 40-50% |
| PAI-I (4G/5G) | 16 (33,3%) | 18 (37,5%) | 70,8% | 50-70% (4G/4G – 5-8%) |
| ITGA 2-гликопротеин (807 С/T) | 22 (45,8%) | 8 (16,7%) | 62,5% | 20-40% |
| ITGB 3 –гликопротеин (1565 T/С) | 9 (18,75%) | 2(4,2%) | 22,95% | 10-20% |
| ген фибриногена FGB (455G/A) | 18 (37,5%) | 0 | 37,5% | 5-20% |
| фактора свертывания VII (10976 G/A) | 6 (12,5%) | 0 | 12,5% | 10-20% |
| ген F13 | 16 (33,3%) | 0 | 33,3% | 15-25% |
Мутация G1691A (Лейденская) в гене V фактора свертывания крови. Носители обладают повышенной склонностью к развитию сосудистых тромбозов, являющихся фактором риска венозных и артериальных тромбоэмболий, инфаркта миокарда и инсульта. Гетерозиготными носителями Лейденской мутации являются 4–6 % европейского населения, причем риск тромбообразования увеличивается в 3–7 раз при гетерозиготном и в 80 раз при гомозиготном носительств. В изучаемой группе гетерозиготное состояние гена F5 1691 G/ A выявлено у 3 пациентов (6,25%), гомозиготное носительство не обнаружено.
Мутация фактора II G20210A. Мутация связана с увеличением уровня протромбина в плазме, который может быть в 1,5–2,0 раза выше, чем в норме. Это приводит к пожизненному состоянию гиперкоагуляции, что связано примерно с 3-4-кратным увеличением риска развития венозного тромбоза [7]. Мутация гена протромбина у больных гемофилией, проживающих в Алтайском крае, обнаружена не была, хотя ее встречаемость в европейской популяции составляет 2-3%.
Полиморфизм 5G(-675)4G в гене SERPINE1(PAI-1). Гомозиготная мутация 4G/4G полиморфизма – 675 4G/5G является фактором риска для развития тромбозов, инфаркта миокарда [6]. Распространенность гомозиготной формы 4G/4G в европейских популяциях составляет 5–8 %. В данном исследовании дефект в гене PAI-1 выявлен у 34 больных (70,8%), причем гомозиготный мутантный генотип 4G/4G, ассоциированный с наибольшим риском тромбообразования, встречался у 18 (37,5%) больных.
Полиморфизм MTHFR Ala222Val (-677С>Т). Полиморфизм MTHFR широко распространен в европейской популяции, гетерозиготными носителями, по некоторым данным являются 60% европейцев, гомозиготными – 4-15%. У лиц гомозиготных по данной мутации (генотип Т/Т) отмечается термолабильность MTHFR и снижение активности фермента примерно до 35% от среднего значения, что почти в 10 раз повышает риск развития гипергомоцистеинемии, что может привести к повышенному риску тромбообразования. В проведенном наблюдении данный полиморфизм встретился у 31 (64,6%) больного, гомозиготный вариант в 11(22,9%) случаях.
Полиморфизм гена MTRR A66G изменяет биохимические свойства фермента метионин-синтазы редуктазы, в котором происходит замена аминокислоты изолейцин на метионин. В результате этой замены функциональная активность фермента снижается, что приводит к гипергомоцистеинемии, что может привести к повышенному риску тромбообразования. У обследуемых больных гемофилией мутантный G аллель встретился в 45,8% случаев, что сопоставимо с европейской популяцией (40-50%).
Полиморфизм G10976A в гене VII фактора свертывания крови способствует снижению активности F7 и уменьшению тромбообразования. Генотип А/А является причиной снижения активности фермента F7 на 72 %, по сравнению с диким типом (генотип G/G). Гетерозиготное носительство данного дефекта выявлено 6 (12,5%) больных гемофилией, что сопоставимо с распространенностью в европейских популяциях (10-20%). Гомозиготный мутантный генотип А/А, ассоциированный со снижением риска тромбообразования, не встречался в группе исследованных больных.
Полиморфизм G455A в гене фибриногена. Данный полиморфизм сопровождается повышенной экспрессией гена фибриногена, что приводит к увеличению содержания фибриногена в крови и повышает вероятность образования тромбов, что способствует увеличению риска тромбоза. При сопоставлении частот отдельных генотипов установлено, что в группе больных гемофилией чаще отмечено гетерозиготное носительство (генотип G/A) – у 18 (37,5%) больных по сравнению с европейской популяцией (5-20%). Гомозиготный мутантный аллель А/А ни у кого из обследованных не выявлен.
Полиморфизм С807Т в гене ITGA2. Наличие Т-аллеля ассоциируется с увеличением скорости адгезии тромбоцитов, что может являться фактором риска тромбофилии. В европейской популяций данный аллель встречается в 20-40% случаев, в то время как в группе исследуемых больных гемофилией T-аллель встретился у 30 (62,5%)больных, в т.ч. в гомозиготном варианте у 8(16,7%) больных, в гетерозиготном варианте у 22(45,8%) больных.
Полиморфизм Т1565С в гене ITGВ3. Тромбоциты носителей С аллеля имеют повышенную склонность к агрегации, что может являться увеличением риска тромбообразования, приводящего к сердечно-сосудистой патологии. При сопоставлении частот отдельных генотипов установлено, что гомозиготное носительство «мутантного» генотипа СС отмечается у 2(4,5%) больных гемофилией, в то же время «мутантный» гетерозиготный аллель С/Т встречался у 9 (18,75%) больных, тогда как в европейской популяции встречаемость аллеля С не превышает 20%.
Полиморфизм Val34Leu А-субъединицы фактора XIII . С помощью электронной микроскопии было показано, что для варианта фактора XIII, содержащего 34Leu, характерно образование более тонких фибриновых волокон и менее пористая структура сгустка, чем в случае «нормального» варианта Val/Val, что может привести к гипокоагуляции [5]. Частота встречаемости мутантного аллеля в европейской популяции составляет 15-25%, в то время как у исследуемых больных гемофилией данный аллель встретился у 16 (33,3%) больных.
Важным результатом является выявление большого числа сочетанных форм полиморфизмов исследуемых генов. Во всех случаях отмечается сочетание не менее 3-х полиморфизмов у каждого больного. У 12 больных сочетаются 5 и более полиморфизмов. Ни у одного из пациентов не выявлено изолированного дефекта исследуемых генов.
Таблица 2.
Сочетания полиморфизмов системы гемостаза у больных гемофилией.
| Количество полиморфизмов | Количество больных |
| 1 | 2 (4%) |
| 2 | 4 (8%) |
| 3 | 7 (14,3%) |
| 4 | 9 (18,4%) |
| 5 и более | 26 (53,1%) |
На наш взгляд, обнаруженные у наших больных сочетания тромбогенных полиморфизмов значительно увеличивают предрасположенность к тромботическим состояниям.
Выводы. У больных гемофилией в Алтайском крае обнаружена высокая частота сочетанных форм мутаций и полиморфизмов в генах системы гемостаза, что повышает тромбогенный потенциал системы крови.
Список литературы:
- Буевич Е.И., Котовщикова Е.Ф., Богданова И.В. Особенности сосудисто-тромбоцитарных нарушений и генетический полиморфизм системы гемостаза у больных гемофилией с мезенхимальной дисплазией//Вестник Алтайской науки. — №1(4). — 2009. — с. 7-15
- Залуцкий И. В., Машевский А. А., Смолякова Р. М. Молекуляно-генетические аспекты патогенеза венозных тромбозов и тромбоэмболии легочной артерии// //Онкологический журнал. — 2007. — №2(2). — с.1-18
- Момот А.П., Строзенко Л.А., Цывкина Л.П и др. Первичная тромбопрофилактика у детей Алтайского края на основе выявления и модификации постоянных и временных факторов тромбогенного риска. — Барнаул: Изд-во АГМУ, 2013. — 83 с.
- Шевела А. И., Егоров К. С., Севастьянова К. С., Новикова Я. В. Флеботромбоз и врожденная тромбофилия/ //Ангиология и сосудистая хирургия. — 2011. — №5. — с.95-99
- Arins RA, Philipou H,Nagaswami C at al. The factor XIII V34L polymorphism accelerates thrombin activation of factor XIII and affects cross-linked fibrin structure.//Blood. — 2000. — Vol.96(3). — P.988-95
- Pastinen T, Perola M, Niini P at al. Array-based multiplex analysis of candidate genes reveals two independent and additive genetic risk factors for myocardial infarction in the Finnish population//Hum Mol Genet. — 1998. — Vol. 7(9). — P.1453-62
- Rosendaal FR, Doggen CJ, Zivelin A, et al. Geografic distribution of the 20210 G to A protrombin variant//Thromb Haemost. — 1998. — Vol.79. — P.706-708.[schema type=»book» name=»Полиморфизмы генов системы гемостаза у больных гемофилией» author=»Копылов Андрей Николаевич, Елыкомов Валерий Анатольевич, Гридчина Анна Владимировна» publisher=»БАСАРАНОВИЧ ЕКАТЕРИНА» pubdate=»2017-04-03″ edition=»ЕВРАЗИЙСКИЙ СОЮЗ УЧЕНЫХ_30.04.2015_04(13)» ebook=»yes» ]