Введение. Коричник китайский (Cinnamomum cassia (L.) C. Presl) широко используются в качестве пищевых растений (пряностей) в различных странах. Монографии на кору коричника китайского представлены в ведущих зарубежных фармакопеях [3, с.81]. Поиск новых источников лекарственного растительного сырья для расширения отечественной номенклатуры лекарственных средств продолжает быть актуальным. Ранее проведенные нами исследования позволили установить, что фенольные соединений коры C.cassia представляют значительный интерес для дальнейшего изучения и использования в отечественной медицине как источников ценных биологически активных веществ [4, с.19-21].По литературным данным кора коричника китайского содержит до 42% фенольных соединений [7, с.509-522]. Нами предлагается методика определения суммы полифенольных соединений методом спектрофотомерии с использованием в качестве стандартного образца (+)-катехин. Преимущество использования спектрофотометрического метода со стандартным образцом обусловлено возможностью оценить содержание полифенолов, обладающих максимумом поглощения при длине 270-280 нм [6, с.55-60].
Целью даннойработы являлась разработка и валидация методики количественного содержания полифенольных соединений в Коричника китайского коре.
Материалы и методы исследования.Объекты исследования –промышленные серии коры коричника (корицы), соответствующие требованиям ГОСТ 29049-91 «Пряности. Корица. Технические условия».
В основу методики количественного определения положен метод прямой спектрофотометрии [6, с.55-60]. При разработке методики количественнойоценки полифенольных соединений был изучен спектр поглощения спирто-водного извлечения из Коричника китайского корыв сравнении с УФ-спектром (+)-катехина. Согласно полученным данным, максимум поглощения исследуемого извлечения находится при длине волны 270-290 нм и практически совпадает с максимумом (+)-катехин. Это позволяет сделать вывод о том, что характер кривой поглощения извлечения из Коричника китайского коры определяется в основном полифенольными соединениями, и использовать при анализе длину волны 279 нм для спектрофотометрического определения суммы полифенольных соединений в пересчете на (+)-катехин.
Результаты.При разработке методики количественного определения суммы полифенольных соединений изучены следующие условия: измельченность сырья, характера экстрагента, соотношение сырья и экстрагента, продолжительности экстракции.
Спиртовой раствор (+)-катехина подкисляли для подавления ионизации фенольных гидроксилов [6, с.55-60].
На основании полученных результатов (Таблица 1) подобраны оптимальные условия: измельченность сырья – 1 мм; экстрагент – спирт этиловый 50 %; соотношение сырья и экстрагента – 1:100; время экстракции – 60 мин.Расчет содержания суммы полифенольных соединений проводили в пересчете на (+)-катехин по его удельному показателю поглощения, равному 144 [6, с.55-60]. Описанные выше условия позволили разработать методику количественного определения суммы полифенольных соединений.
Валидациюметодики проводили по следующим показателям: линейность, повторяемость, внутрилабораторная воспроизводимость и правильность [1, с.14-17;2, с.50-53; 5, с.1-48].
Определение линейности проводили на 5 уровнях концентраций гиперозида – 20%, 60%, 100%, 140%, 200%, от нормируемого значения. Значение оптической плотности рассчитывалось как среднее из трех измерений. Критерием приемлемости линейности являлся коэффициент корреляции и если его величина близка единице, то совокупность данных можно описать прямой линией. Величина коэффициента корреляции должен быть не менее 0,995. Коэффициент корреляции в эксперименте составил 0,9973.
Таблица 1.
Результаты определения влияния условий экстракции на выход полифенольных соединений из Коричника китайского коры
| Условия экстракции |
Содержание суммы полифенольных соединений в пересчете на (+)-катехин, % |
|
Размер частиц сырья, мм
|
| 5-7 |
55,24 |
| 1-2 |
65,04 |
|
Концентрация этанола, %
|
| 40 |
63,13 |
| 50 |
65,04 |
| 70 |
64,59 |
| 96 |
54,87 |
|
Соотношение сырья и экстрагента
|
| 1:66 |
61,86 |
| 1:100 |
65,04 |
| 1:200 |
62,99 |
|
Время экстракции, мин
|
| 30 |
62,02 |
| 60 |
65,04 |
| 90 |
64,98 |
| 120 |
63,48 |
Повторяемость методики определяли на одном образце сырья в 6 повторностях в течение короткого промежутка времени с использованием одних и тех же реактивов и оборудования. Критерий приемлемости выражался величиной относительного стандартного отклонения, которое не должно превышать 10 %. Он составил 1,05%, что свидетельствует о прецизионности методики в условиях повторяемости.
Определение внутрилабораторной воспроизводимости методики проводили 2 инженера-химика на 3 образцах в трех повторностях. Критерий приемлемости выражался величиной относительного стандартного отклонения, которое не должно было превышать 15 %. Он составил 1,62 %, что указывает на прецизионности методики в условиях воспроизводимости.
Правильность методики устанавливали путем измерения количественного содержания суммы полифенольных соединений в пересчете на (+)-катехин в растворах, полученных путем добавления необходимого количества стандарта к исследуемому раствору для концентраций 120 %, 150 %, 175 %, 200 % (четыре уровня). Критерием приемлемости являлся средний % восстановления при использовании растворов концентраций 120 %, 150 %, 175 %, 200 % скорректированный на 100 % и его средняя величина должна находиться в следующих пределах 100+5 %. Показано, что % восстановления находился в пределах от 98,95% до 101,61%, и его средняя величина составила – 100,41%.
На основании полученных результатов данную методику можно считать прошедшей валидацию.
В ходе исследований установлено, что методика легко воспроизводима, доступна, занимает минимум рабочего времени, не требует дорогостоящих реактивов. Она позволяет объективно оценивать качество лекарственного растительного сырья коричника китайского, используемое для получения лекарственных препаратов, содержащих водорастворимые вещества. Анализ предлагаемой методикой промышленных партий сырья показал, что содержание суммы полифенольных соединений в пересчете на (+)-катехин колеблется от 56,99 до 65,04% (Таблица 2). Это позволяет предложить норму содержания биологически активных веществ не менее 50%.
Выводы.Разработана методика количественного содержания суммы полифенольных соединений в пересчете на (+)-катехин в Коричника китайскогокоре. Установлены параметры линейности, повторяемости, воспроизводимости и правильности разработанной методики. Предложена норма содержания биологически активных веществ в Коричника китайского коре для включения в нормативную документацию на сырье.
Таблица 2.
Результаты определения содержания полифенольных соединений
в Коричника китайского коре (среднее из 6 определений)
| Образец Коричника китайского коры |
Содержание суммы полифенольных соединений в пересчете на (+)-катехин, % |
| Коричника кора цельная, ООО «ПК «МЭТР», 2012 г. |
62,88 |
| Коричника кора цельная, ООО «Здрава Краса», 2012 г. |
58,25 |
| Коричника кора цельная, ООО «Здрава Краса», 2013 г. |
56,99 |
| Коричника кора цельная, «Kota`nyi», 2014 г. |
65,05 |
| Среднее значение |
60,79 |
Список литературы:
- Евдокимова О.В. Валидация методики количественного определения суммы флавоноидов в столбиках с рыльцами кукурузы. //Фармация. -2008. №7. -С. 14-17.
- Евдокимова О.В. Разработка и валидация методики количественного определения суммы флавоноидов в траве пастушьей сумки// Журнал «Традиционная медицина». – 2011. — №1 (24). — С.50-53.
- Ненелева Е.В. Представители рода CinnamomumL. как источник лекарственного растительного сырья. // Сборник тезисов материалов Первой Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых «Проблемы разработки новых лекарственных средств», Москва, 2013. – С.81.
- Ненелева Е.В., Евдокимова О.В. Кора корицы: анализ фенольных соединений// Фармация. – №7.- 2014. – С.19-21.
- Руководство по валидации методик анализа лекарственных средств/ Под ред. Н.В.Юргеля, А.Л.Младенцева, А.В.Бурдейна и др. Разработчики: В.Л.Багирова, А.И.Гризодуб, Т.Х.Чибиляев и др. — М., 2007. — 48 с.
- Сокольская Т.А., Сайбель О.Л., Даргаева Т.Д. и др. Сабельник болотный – перспективный источник получения лекарственных средств, рекомендуемых при заболеваниях опорно-двигательного аппарата. – М.: Серебряные нити, 2008. – С.55-60.
- Wang HF, Wang YK, Yih KH. DPPH free-radical scavenging ability, total phenolic content, and chemical composition analysis of forty-five kinds of essential oils.//J Cosmet Sci. – 2008. – 59. -Р. 509-522.[schema type=»book» name=»РАЗРАБОТКА И ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИКИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОЛИФЕНОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ В КОРИЧНИКЕ КИТАЙСКОМ» description=»Цельюданнойработы являлась разработка и валидация методики количественного определения полифенольных соединений в коре коричника китайского. Материалы и методы исследования. Объектами исследования служили промышленные серии коры коричника (корицы). Определение количественного содержания биологически активных веществ проводили спектрофотометрическим методом. Результаты. На основании полученных данных подобраны оптимальные условия и предложена методика определения суммы полифенольных соединений с использованием в качестве стандартного образца (+)-катехин.На основании полученных результатов данную методику можно считать прошедшей валидацию. Анализ предлагаемой методикой промышленных партий сырья показал, что содержание суммы полифенольных соединений в пересчете на (+)-катехин колеблется от 56,99 до 65,04%. Это позволило предложить норму содержания биологически активных веществ не менее 50%. Выводы. Разработана и валидирована методика количественного содержания суммы полифенольных соединений в пересчете на (+)-катехин в Коричника китайского коре. Предложена норма содержания биологически активных веществ в Коричника китайского коре для включения в нормативную документацию на сырье.» author=»Ненелева Елена Викторовна, Евдокимова Ольга Владимировна» publisher=»БАСАРАНОВИЧ ЕКАТЕРИНА» pubdate=»2017-02-17″ edition=»ЕВРАЗИЙСКИЙ СОЮЗ УЧЕНЫХ_29.08.2015_08(17)» ebook=»yes» ]
