С каждым годом возрастает популярность лекарственных препаратов растительного происхождения, обусловленная их относительной безопасностью и высокой эффективностью, детерминированной поливалентностью фармакологического действия биологически активных веществ растений.
В то же время поиск малотоксичных лекарственных средств, обладающих антимикробной активностью, остается актуальной проблемой фармации. Одним из биологически активных веществ растений, обладающий антибактериальными свойствами является хлорофилл. Интересным представляется факт отличия по составу хлорофиллов высших растений и водорослей. Если наземные растения в своем большинстве содержат хлорофиллы a и b, то в химическом составе водорослей встречаются хлорофиллы a, b, c1, c2, c3 и d. Распространенная в акватории белого моря водоросль ламинария сахарисиая (Laminaria saccharina L., Laminariaceae) наряду с другими видами биологической активности, обладает антибактериальными и ранозаживляющими свойствами, обусловленными присутствием хлорофиллов a, с1 и с2 [1, с. 7].
Противомикробная активность масляного концентрата суммы хлорофиллов, выделенной из воздушно–сухого сырья ламинарии сахаристой, была изучена на примере динамики ингибиции роста Staphylococcus aureus, свежевыделенного при гнойно-воспалительном процессе, и штамма Staphylococcus aureus subsp. aureus Rosenbach (ATCC® 25923™, USA) [2, с. 25, 3, с. 85].
Целью настоящего исследования являлось изучение влияния масляного мацерата воздушно-сухого сырья ламинарии сахаристой на рост неспорогенных анаэробных бактерий рода Bacteroides (Bacteroides fragilis, Bacteroides melaninogenicus, Bacteroides sp.).
Для реализации поставленной цели получали мацерат воздушно-сухого сырья ламинарии сахаристой с учетом оптимальных параметров [4]: точную массу воздушно сухого сырья, около 10 г измельчали и просеивали через лабораторные сита с отверстиями диаметром 1,12 мм. К растительному сырью прибавляли 100,0 мл масла льняного, перемешивали и оставляли в темном прохладном месте. Мацерацию осуществляли в течение 10 суток при периодическом помешивании, после чего масляный слой декантировали а твердый остаток отжимали через ватно–марлевый пресс. Объединенные жидкости перемешивали и центрифугировали при 5000 об/мин в течение 10 мин [4, с. 72].
Для количественного определения суммы хлорофиллов методом УФ–спектрофотометрии, 1,0 мл полученного экстракта помещали в мерную колбу вместимостью 10 мл, объем раствора доводили ацетоном до метки. Спектры получали в области 350 – 750 нм, используя в качестве раствора сравнения ацетон (рис. 1).
Рисунок 1. Спектр хлорофиллов ламинарии сахаристой
Содержание суммы хлорофиллов рассчитывали по формулам Jeffrey S.W. and Humphrey G.F. для использования в качестве растворителя 90% раствора ацетона [5, с. 193], в результате чего было установлено, что в полученном мацерате содержится 258,5 мкг/мл суммы хлорофиллов (среднее значение по шести определениям).
С целью исследования антибактериальных свойств, супернантат фильтровали через мембранный фильтр для стерилизующей фильтрации с размером пор 0,45 мкм. После чего готовили серию разведений с использованием стерильного льняного масла для определения минимальной подавляющей концентрации.
Посев бактериальной суспензии, приготовленной по Мак-Фарланду [6, с. 307], осуществляли на среду Шадлера на агаровой основе. С этой целью в пробирки вносили по 0,5 мл бактериальной смеси и разведений мацерата с содержанием 258,50 мкг/мл; 179,50 мкг/мл; 129,25 мкг/мл; 86,17 мкг/мл и 43,08 мкг/мл. К полученным смесям добавляли по 9 мл питательной среды, содержание пробирок перемешивали. Полученные смеси инкубировали при 37° С в течение 48 часов, после чего оценивали наличие или отсутствие роста.
В ходе проведенных исследований было установлено, что мацерат ламинарии сахаристой подавляет рост анаэробных микроорганизмов, с учетом объема питательной среды, в концентрации 4,3 мкг/мл (рис. 2).
1– контроль; 2 – разведение с содержанием хлорофиллов 25,8 мкг/мл;
3 – разведение с содержанием хлорофиллов 4,3 мкг/мл
Рисунок 2. Влияние масляного мацерата воздушно-сухого сырья ламинарии сахаристой на рост анаэробных бактерий рода Bacteroides spp.
Таким образом, в ходе проведенных исследований было установлено, что масляный мацерат воздушно-сухого сырья ламинарии сахаристой подавляет рост неспорогенных анаэробных бактерий рода Bacteroides и может быть использован для получения лекарственных средств по технологии, исключающей необходимость применения органических растворителей, что особенно важно в педиатрии и гериатрической практике.
Список литературы:
- Струсовская, О.Г. Ресурсоведческие и фитохимические исследования перспективных видов сырья дикорастущих растений островов Соловецкого архипелага : автореф. дис. … докт. фарм. наук / О. Г. Струсовская. – Пятигорск, 2014. – 48 с.
- Струсовская, О. Г. Исследование возможности использования геля на основе концентрата хлорофиллов в качестве ранозаживляющего средства / О. Г. Струсовская, Л. П. Лисишникова // Найновите постижения на Европейската наука-2011 : материали за VII междунар. науч. – практ. конф. — София, 2011. — Т. 31. — С. 25—28.
- Струсовская, О. Г. Исследование антимикробной активности концентрата хлорофиллов из Laminaria saccharina (Laminariaceae L.) / О. Г. Струсовская, Л. П. Лисишникова // Найновите постижения на Европейската наука-2011 : материали за VII междунар. науч. практ. конф. — София, 2011. —Т. 32. — С. 85—88.
- Pampukha, The determination of the optimal parameters for the sum of chlorophylls from the Laminaria saccharina (Laminariaceae L.) complete extraction using maceration / A. Pampukha // Нац. ассоц. ученых. – 2015. – Vol. 10. – p. 71 – 73.
- Jeffrey, S. W. New Spectrophotometric Equations for Determining Chlorophylls a, b, c1 and c2 in Higher Plants, Algae, and Natural Phytoplankton / W. Jeffrey, G. F. Humphrey // Biochem. und physiol. der pflan. – 1975. – Vol. 167. – p. 191-194.
- Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. Методические указания. МУК 4.2.1890-04 // Клин. микробиол. антимикроб. химиотер. – 2004. – Т. 6. – № 4. – С. 306–359.[schema type=»book» name=»ИССЛЕДОВАНИЕ АНТИМИКРОБНОЙ АКТИВНОСТИ МАЦЕРАТА ВОЗДУШНО–СУХОГО СЫРЬЯ ЛАМИНАРИИ САХАРИСТОЙ (LAMINARIA SACCHARINA L., LAMINARIACEAE)» description=»Целью настоящего исследования являлось изучение влияния масляного мацерата воздушно-сухого сырья ламинарии сахаристой на рост неспорогенных анаэробных бактерий рода Bacteroides на агаре Шадлера. Содержание суммы хлорофиллов в мацерате определяли методом УФ–спектрофотометрии. В результате проведенных исследований было установлено, что мацерат с содержанием суммы хлорофиллов 4,3 мкг/мл подавляет рост анаэробных микроорганизмов и может быть использован для получения лекарственных форм, обладающих антимикробной активностью, по технологии, исключающей необходимость применения органических растворителей.» author=»Пампуха Анастасия Геннадьевна, Лисишникова Людмила Петровна» publisher=»БАСАРАНОВИЧ ЕКАТЕРИНА» pubdate=»2017-02-27″ edition=»ЕВРАЗИЙСКИЙ СОЮЗ УЧЕНЫХ_25.07.15_07(16)» ebook=»yes» ]