Бактерии вида Ornithobacterium rhinotracheale сравнительно недавно признали в качестве патогенного возбудителя заболевания респираторных путей у значительного числа цыплят и индеек.
В статье описаны результаты исследований по изучению тинкториальных, культуральных и биохимических свойств бактерий вида Ornithobacterium rhinotracheale – возбудителей орнитобактериоза птиц.
Цель и задачи исследования
Цель изучить основные биологические свойства бактерий вида Ornithobacterium rhinotracheale на референс-штаммах К 282 и К 33, полученных из музея НИИЦМиБ ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА», для изучения возможности создания инактивированной вакцины против орнитобактериоза птиц.
Изучение биологических свойств бактерий вида Ornithobacterium rhinotracheale проводилось по классическим методикам [1].
Результаты исследований
Тинкториальные свойства бактерий Ornithobacterium rhinotracheale устанавливали путем микроскопии под иммерсионной системой мазка суточной культуры, окрашенной по Грамму. Результат микроскопического исследования мазка бактерий O. rhinotracheale, окрашенного по Грамму представлен на рисунке 1.
Рисунок 1. Окраска по Грамму референс-штамма O. rhinotracheale К 282 увеличение ×100×15
Микроскопию проводили методом негативного контрастирования 1,5% фосфорно-вольфрамовой кислотой (ФВК). Просматривали препараты на микроскопе HV-12A (фирмы Hitachi) при ускоряющем напряжении 75 кВ и увеличении 35×103. Фиксировали культуру 2%-ным раствором OsO4. Результаты электронного микроскопии представленные на рисунке 3 дают характерную информацию морфологии данного микроорганизма.
Для изучения культуральной характеристики использовали тесты, которые наиболее полно характеризуют ферментативные свойства бактерий вида Ornithobacterium rhinotracheale. По результатам исследования получили следующие результаты: во-первых, интенсивное синие окрашивание дисков при исследовании на оксидазу (HiMedia) (рисунок 2) свидетельствует о положительной их реакции на цитохромоксидазу; индол и сероводород они не образуют; при добавлении метилового красного кислоту не образуют и окрашивание среды остается желтого цвета; на среде Симмонса цитрат не утилизируют; фермент ДНК-аза не деполимеризует ДНК вокруг культуры и цвет среды остается без изменений (рисунок 3). При ферментации углеводов производят слабое сбраживание (интенсивное синее окрашивание по ходу укола практически без изменения цвета среды) лактозы, сахарозы (рисунок 4), глюкозы (рисунок 5), мальтозы, маннит, маннозы.
При изучении биохимических свойств бактерий Ornithobacterium rhinotracheale на тест — системе по ускоренной типизации, произведенные ФГУН НИИЭМ им. Пастера получены следующие результаты (рисунок 6):
- на сероводород – результат отрицательный (черного осадка нет),
- на орнитин – результат положительный (синее окрашивание).
Таблица 1.
Показатели исследований на биохимические свойства референс штаммов бактерий Ornithobacterium rhinotracheale
| Наименование тестов
|
Ornithobacterium rhinotracheale К 282 | Ornithobacterium rhinotracheale К33 |
| Каталаза | — | — |
| Оксидаза | + | + |
| Индол | — | — |
| Сероводород | — | — |
| метиловый красный | — | — |
| утилизация цитрата | — | — |
| ДНКаза | — | — |
| O/F | + | + |
| Лактоза | + | + |
| Сахароза | + | + |
| Глюкоза | + | + |
| Мальтоза | + | +/- |
| Гемолиз | — | — |
| Манноза | + | + |
| Маннит | + | + |
- на лизин – результат отрицательный (сине-зеленой окраски нет),
- на аргинин — результат отрицательный (зеленого или синего окрашивания нет),
- на уреазу – результат отрицательный (малинового окрашивания нет),
- на индол – результат отрицательный (красное кольцо отсутствует),
- на арабинозу – результат отрицательный (окрашивание малиновое),
- на маннозу — результат положительный (окрашивание желтое),
- на сахарозу — результат положительный (окрашивание желтое),
- на глюкозу — результат положительный (окрашивание желтое),
- на маннит — результат положительный (окрашивание желтое),
- на адонит — результат отрицательный (окрашивание малиновое),
- на сорбит — результат отрицательный (окрашивание малиновое),
- на лактозу — результат положительный (окрашивание желтое).
Рисунок 6. Планшет с результатами тест-системы по изучению биологических свойств бактерий вида Ornithobacterium rhinotracheale (референс-штамм O. rhinotracheale К 282)
Таблица 2.
Показатели ферментативной активности бактерий Ornithobacterium rhinotracheale по тест — системе для ускоренной типизации (ФГУН НИИЭМ им. Пастера)
| Наименование тестов | Ornithobacterium rhinotracheale К 282 | Ornithobacterium rhinotracheale К33 |
| Сероводород | — | — |
| орнитиндекарбоксилаза | + | + |
| Лизиндегидролаза | — | — |
| Аргининдегидролаза | — | — |
| Уреаза | — | — |
| Индол | — | — |
| Арабиноза | — | — |
| Манноза | + | + |
| Сахароза | + | + |
| Глюкоза | + | + |
| Маннит | + | + |
| Адонит | — | — |
| Сорбит | — | — |
| Лактоза | + | + |
Определения морфологических и фенотипических факторов на гемолитическую активность проводили на триптозо-соевом агаре (Difko) с добавлением 10 % овечьей и человеческой дефибринированной крови. Для чего культуру предварительно культивировали в течение 48 ч при 37 0С на бульоне Хоттингера. При изучении гемолитической активности не зависимо от вида донора, чья кровь была использована, зона разрушения эритроцитов не обнаружена (рисунок 6 — 7).
Выводы. Путем микроскопии под иммерсионной системой мазка суточной культуры, окрашенной по Грамму, установлены тинкториальные свойства бактерий Ornithobacterium rhinotracheale — это небольшие грамотрицательные палочки с круглыми концами, спор и капсул не образуют. Опытным путем доказаны ферментативные свойства, отсутствие способности образовывать индол, сероводород и утилизировать цитрат; не зависимо от вида донора гемолитическая активность (разрушения эритроцитов) не выявлена.
Список литературы
- Васильев Д.А. ПРОБЛЕМЫ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ОРНИТОБАКТЕРИОЗА / Н.Х. Курьянова, Н.И. Молофеева, Д.А. Васильев // Научный вестник – Димитровград, 2009 – с.170-174.
- Курьянова Н.Х. ТИНКТОРИАЛЬНЫЕ И БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ORNITHOBACTERIUM RHINOTRACHEALE, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ / Н.Х Курьянова, А.С. Разорвина, Н.И. Молофеева, Д.А. Васильев // Материалы Международной научно-практической конференции на тему Актуальные вопросы аграрной науки и образования, посвященной 65-летию УГСХА, эпизоотологии, ВСЭ, биотехнологии – Ульяновск, 2008 – с.155-161.
- Курьянова Н.Х., БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА БАКТЕРИЙ ВИДА ORNITHOBACTERIUM RHINOTRACHEALE – ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ОРНИТОБАКТЕРИОЗА ПТИЦ Фундаментальные исследования. 2013. № 11-4. С. 679-682.
- Hinz K.-H., C. Blome, M. Ryll Acute exudative pneumonia and airsacculitis associated with Ornithobacterium rhinotracheale in turkey// Vet. Rec., 1994, 135, p. 233-234.
- Travers A.F. Concomitant Ornithobacterium rhinotracheale and New-castle disease infection in broilers in South Africa// Avian dis., 1996,40:488-490. UDC 619:578[schema type=»book» name=»ОСНОВНЫЕ КУЛЬТУРАЛЬНЫЕ И БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА РЕФЕРЕНС-ШТАММОВ БАКТЕРИИ ORNITHOBACTERIUM RHINOTRACHEALE» author=»Курьянова Назия Хусаиновна» publisher=»БАСАРАНОВИЧ ЕКАТЕРИНА» pubdate=»2017-04-21″ edition=»ЕВРАЗИЙСКИЙ СОЮЗ УЧЕНЫХ_ 28.03.2015_03(12)» ebook=»yes» ]