Токсический гепатит (ТГ) – это заболевание печени, острого или хронического течения, развивающееся в результате попадания в организм гепатотропных ядов (лекарственные препараты, алкоголь, токсины грибов), токсического действия их на клетки печени, сопровождающееся воспалением и гибелью клеток.В механизмах токсического повреждения печени большое значение имеет возникновение свободных радикалов (СР) в мембранах эндоплазматического ретикулума при биотрансформациимикросомальнымиоксигеназамиксенобиотиков[4]. Имеются данные, что одной из мишеней действия СР является аконитатгидратаза (АГ, К.Ф.4.2.1.3) [3]. Снижение активности данного фермента может приводить к накоплению цитрата, являющегося эффективным низкомолекулярным антиоксидантом, вследствие хелатирующих свойств по отношению к ионам Fe2+[5].
Значительный интерес представляет исследование действия биологически активных веществ, обладающих антиоксидантными свойствами.Ряд исследований свидетельствуют, что некоторые гидроксихинолиныоказывают положительное влияние при окислительном стрессе и обладают антиоксидантной активностью. В рамках нашего исследования был проведен поиск производных гидроксихинолинов с целевой биологической активностью с помощью программы прогноза «структура-свойство» PASS и отобран — 6-гидрокси-2,2,4 – триметил – 1,2 дигидроксихинолин.
В этой связи целью настоящей работы явилась оценка содержания цитрата и активности АГ в тканях печени и сыворотке крови крыспри введении 6-гидрокси-2,2,4 – триметил – 1,2 дигидроксихинолинана фоне экспериментальноготоксического гепатита.
В качестве объекта исследования использовали самцов белых лабораторных крыс (RattusrattusL.) массой 150-200 г. Животные были разделены на следующие экспериментальные группы: 1-я группа (контроль) содержалась на стандартном режиме вивария; 2-ая группа– животные, которым длясоздания модели экспериментального токсического гепатита вводили четыреххлористый углерод, являющейся органоспецифичным токсином, обладающимгепатотропным действием. После суточной пищевой депривации животным однократно вводили четыреххлористый углерод в дозе 0,064 мл в виде раствора в 1 мл вазелинового масла на 100 г веса животного [7]. Забой животных производили на 4 сутки, когда наблюдался максимальный цитолиз гепатоцитов; в 3-й группе животным после индуцирования ТГ вводили внутрибрюшинно6-гидрокси-2,2,4 – триметил – 1,2 дигидроксихинолинв дозе 50 мг/кг веса животногов виде раствора в 0,9% NaCl, ежедневно в течение 3-х дней.
Навески тканей печени крысы гомогенизировали в 4-х кратном объеме охлажденной среды выделения (0,1М трис-НСl-буфер (рН 7,8), содержащий 1мМ ЭДТА, 1% b-меркаптоэтанол) и центрифугировали при 10000g в течение 12 мин. Активность АГ определяли на спектрофотометре HitachiU-1900 с программным обеспечением при 233 нм в среде, содержащей 0,05 мМтрис-НСl-буфер (рH 7,8), 4 мМ цитрат. За ферментативную единицу (Е) принимали количество фермента, необходимого для превращения 1 мкмоля субстратав 1 мин при 25оС. Количество цитрата определяли по методу Нательсона[6]. Данные обрабатывали с использованием t – критерия Стьюдента, различия считали достоверными при p< 0,05.
Показано, что при введении 6-гидрокси-2,2,4 – триметил – 1,2 дигидроксихинолина, происходило возрастание активности АГ и снижение уровня цитрата по сравнению со значениями при патологии.
Так, активность АГ в печени, выраженная в виде Е на грамм сырой массы, уменьшающаяся в патологическом состоянии в 1,6 раза, возрастала в1,5 раза при введении 6-гидрокси-2,2,4 – триметил – 1,2 дигидроксихинолина в дозе 50 мг/кг.В сыворотке крови крыс активность фермента, снижающаяся при развитии патологии в 1,6 раза, увеличивалась в 1,5 раза (p≤0,05) при введении протектора.
Очевидно, наблюдаемые изменения активности фермента при ТГ, связаны с тем, что в данных условиях происходит активация свободнорадикального окисления (СО), что приводит к разрушению железо-серных кластеров АГ и переводит фермент в неактивную форму[2].Положительное влияние 6-гидрокси-2,2,4 – триметил – 1,2 дигидроксихинолина, вероятно, взаимосвязано с тем, что он, проявляя свое антиоксидантное действие, приводил к детоксикации СР, что способствовало уменьшению степени повреждения молекулы фермента и изменению активности АГ в сторону контроля.
|
А |
Б |
Рисунок 1. Активность аконитатгидратазы в печени (A) и сыворотке крови (Б) крыс, в норме (1), при токсическом гепатите (2), при введении 6-гидрокси-2,2,4 – триметил – 1,2 дигидроксихинолина в дозе 50 мг/кг (3).
Согласно полученным результатам, при введении 6-гидрокси-2,2,4 – триметил – 1,2 дигидроксихинолина на фоне развития токсического гепатита в тканях животных отмечается снижение содержания цитрата по сравнению с данными при патологии. Установлено, что содержание цитрата в печени крыс, увеличивающееся при ТГ в 2,0 раза, снижалось при введении 6-гидрокси-2,2,4 – триметил – 1,2 дигидроксихинолина в дозе 50 мг/кг в 1,9 раза (p≤0,05). Уменьшение данного параметра наблюдалось и в сыворотке крови крыс, которым вводили протектор, в 1,4 раза (p≤0,05), уровень которого возрастал в 2,1 раза при ТГ.
|
А |
Б |
Рисунок2. Содержание цитрата в печени (A) и сыворотке крови (Б) крыс, в норме (1), при токсическом гепатите (2), при введении 6-гидрокси-2,2,4 – триметил – 1,2 дигидроксихинолина в дозе 50 мг/кг (3).
В заключение можно отметить, что введение 6-гидрокси-2,2,4 – триметил – 1,2 дигидроксихинолинана фоне развития ТГ приводило к снижению активности АГ в печени и сыворотке крови крыс, что сопровождалось увеличениемсодержания цитрата. Изменение исследуемых показателей в сторону контрольных значений, возможно, связано с уменьшением интенсивности СО при введении исследуемого протектора. Известно, что производные гидроксихинолинов снижают формирование супероксид-анион радикала и гидроксильного радикала. Кроме того, эти вещества приводят к снижению уровня пероксидного окисления липидов[1]. Реализация данных эффектов действия может способствовать снижению количества СР, повреждающих молекулу АГ, что приводит к возрастанию ферментативной активности и снижению содержания цитрата.
Список литературы:
- Anti-dyslipidemic and antioxidative activities of 8-hydroxyquinoline derived novel keto-enamineSchiffs bases / K. V. Sashidhara [et. al.] // Eur J Med Chem. — 2009, — V 44, № 4. — 1813-1821.
- Bulteau A.L. Redox-dependent modulation of aconitase activity in intact mitochondria / A.L. Bulteau, M. Ikeda-Saito, L.I. Szweda // Biochemistry. – 2003. – V 42, № 50. – P. 14846- 14855.
- Gardner P.R., Nguyen D.M., White C.W. Aconitase is a sensitive and critical target of oxygen poisoning in cultured mammalian cells and in rat lungs // Proc. Nat. Acad. Sci. 1994. V. 91. № 25. P. 12248-12252.
- Intrasplenic hepatocellular transplantation corrects hepatic encephalopathy in portacaval-shunted rats / J. Ribero [et al.] // Hepatology.- 1992. – V. 15. – P. 12-18.
- Microstructure and magnetic properties of Al-doped barium ferrite with sodium citrate as chelate agent / D. Chen [et al.] // Journal of Magnetism and Magnetic Materials. – 2013. – V. 337-338. – P. 65-69.
- Афанасьев В.Г. К микрометоду определения лимонной кислоты в сыворотке крови с помошьюфотоэлектроколориметра / В.Г. Афанасьев, В.С. Зайцев, Т.И. Вольфсон // Лаб. дело. — 1973. — №4. — С. 115-116.
- Сидорова В.Ф. Регенерация печени у млекопитающих. / В.Ф. Сидорова, З.А. Рябинина, Е.М. Лейкина. – М.:Медицина, 1966. — 240с.[schema type=»book» name=»АКТИВНОСТЬ АКОНИТАТГИДРАТАЗЫ И СОДЕРЖАНИЕ ЦИТРАТА В ПЕЧЕНИ И СЫВОРОТКЕ КРОВИ КРЫС С ТОКСИЧЕСКИМ ГЕПАТИТОМ ПРИ ВВЕДЕНИИ 6-ГИДРОКСИ-2,2,4 – ТРИМЕТИЛ – 1,2 ДИГИДРОКСИХИНОЛИНА» description=»Проведено исследовано действия 6-гидрокси-2,2,4 – триметил – 1,2 дигидроксихинолина на активность аконитатгидратазы и уровень цитрата в печени и сыворотке крови крыс на фоне развития токсического гепатита. Введение 6-гидрокси-2,2,4 – триметил – 1,2 дигидроксихинолинаживотным с токсическим поражением печени приводило к изменению активностиаконитатгидратазы и концентрации цитрата в сторону нормы, что, по-видимому, связано с позитивным действиемданного соединения на оксидативный статус организма при развитии токсического гепатита, сопряженным с его антиоксидантным действием.» author=»Эссафир Жалалю, Горбенко Марина Владимировна, Шульгин Константин Константинович» publisher=»БАСАРАНОВИЧ ЕКАТЕРИНА» pubdate=»2017-02-23″ edition=»ЕВРАЗИЙСКИЙ СОЮЗ УЧЕНЫХ_25.07.15_07(16)» ebook=»yes» ]