ВЛИЯНИЕ ПРИРОДНЫХ ПРЕПАРАТОВ   НА ПРОТИВООПУХОЛЕВУЮ АКТИВНОСТЬ НА ПРИМЕРЕ АСЦИТНОЙ КАРЦИНОМЫ ЭРЛИХА

В данной работе проводилось исследование лекарственных препаратов, которые обладают иммуномодулирующими свойствами – траметина, арабиногалактана, спиртовой настойки кордицепса. Объектом исследования являлась перевиваемая опухоль асцитной карциномы Эрлиха (АКЭ). Цель работы состояла в изучении противоопухолевой активности исследуемых препаратов, в том числе их влияние на выживаемость лабораторных животных.

Методика эксперимента. В качестве экспериментальных животных использовали беспородных белых мышей-самцов массой 25 – 30 г в возрасте 2 – 3 мес., выращенных во ФГУЗ «Иркутский противочумный научно-исследовательский институт» Роспотребнадзора и содержавшихся в стандартных условиях вивария.

Все исследования были выполнены в соответствии с этическими требованиями по работе с экспериментальными животными, изложенными в следующих нормативно-правовых документах: «Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных» (приложение к приказу МЗ СССР №775 от 12.08.1977 г.); Хельсинская декларация всемирной медицинской ассоциации, 2000 г.; «Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (2005) «Правила лабораторной практики» (приложение к приказу МЗ РФ №708н от 23.08.2010 г.).

Объектом исследования являлись клетки АКЭ, пролиферирующей в перитонеальной полости мышей-самцов.

Для проведения исследований использовали три иммуномодулирующих препарата:

Арабиногалактан (АГ). Полисахарид АГ выделен из древесины лиственницы, который обладает высокой биологической активностью. Препарат был любезно предоставлен д.х.н., проф. В.А. Бабкиным (Иркутский институт химии им. А. Е. Фаворского СО РАН, лаборатория химии древесины).

Спиртовая настойка Кордицепса. Оказывает выраженное иммуномодулирующее и антиоксидантное действие [6, с. 34]. Препарат предоставлен д.б.н., проф. Б.Н. Огарковым (НИИ биологии при ИГУ, лаборатория экспериментальной биотехнологии).

Траметин. Новый ветеринарный препарат, разработанный в лаборатории биотехнологии болезней молодняка сельскохозяйственных животных (зав. лаб. – В.А. Чхенкели, д.б.н., проф.) Иркутского филиала ФГБНУ «Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока». Траметин получают на основе дереворазрушающего гриба Trametes pubescens (Shumach.: Fr.) Pilat. штамм 0663 из Коллекции Ботанического института им. В.Л. Комарова (г. Санкт–Петербург) методом жидкофазной ферментации, с последующим отделением биомассы гриба от культуральной жидкости и её лиофилизацией [9, с. 69].

Российские ученые, изучая гриб рода Trametes, разработали новые препараты широкого спектра действия.

Первый препарат, Леван-1, был разработан в Иркутском государственном медицинском университете. Леван-1 был синтезирован на основе культуры T. pubescens (Shumach:. Fr.) Pilat. штамм 0663 из Коллекции Ботанического института им. В.Л. Комарова РАН (г. Санкт – Петербург), обладающей высокой антимикробной активностью. Медицинский препарат Леван-1 прошел лабораторные испытания в бактериологической лаборатории Иркутской областной детской клинической больницы (ИОДКБ). Была установлена 100 %-ая чувствительность 52 клинических полирезистентных штаммов бактерий родов Pseudomonas, Staphylococcus, Salmonella к препарату Леван-1.

Следующим препаратом, разработанным в Иркутском филиале ГНУ «Институт ветеринарии Сибири и Дальнего Востока» Россельхозакадемии, с использованием современных методов биотехнологии на основе того же продуцента, является ветеринарный препарат Леван-2. Данный препарат оказывает положительный эффект при профилактике и лечении желудочно-кишечных заболеваний новорожденных телят бактериальной этиологии, обладает антимикробной активностью в отношении референтных штаммов микроорганизмов родов Salmonella, Escherichia, Staphylococcus, Streptococcus, Pseudomonas, Bacillus, Enterobacter и клинических штаммов, выделенных от больных животных. На препарат и способ лечения желудочно-кишечных болезней телят получен патент.

Антимикробный препарат Леван-2 также показал высокую противотуберкулезную активность, которая сравнима с активностью широко известных туберкулостатиков, в частности, изониазида.

На основе гриба T. pubescens штамма 0663 был разработан также технологический ингредиент Леван-1, применяемый при производстве пекарских дрожжей. Технологический ингредиент позволяет снизить обсеменение посторонней микробиотой на всех стадиях технологического процесса, а также сократить время брожения, повысить выход и качество продукции, исключить из технологических процессов вредные и агрессивные вещества. Благодаря антимикробным свойствам по отношению к гнилостным бактериям, технологический ингредиент был внедрен на ОАО «Дрожжевой завод» (г. Иркутск), что позволило увеличить стойкость продукции без изменения других показателей качества продукции.

Технологический ингредиент Леван-1 прошел все виды испытаний (лабораторные, полупромышленные, промышленные) на Тельминском спиртзаводе ОАО «Кедр». С помощью ингредиента Леван-1 удалось повысить выход этилового спирта и сократить содержание метанола в конечном продукте [5, с. 19]. Технологический ингредиент был испытан также и в лаборатории дрожжей Ленинградского филиала ВНИИ хлебопекарной промышленности.

Благодаря работам Е.С. Горшиной [2, с. 253], был получен безвредный продукт, обладающий онкостатической активностью в отношении раково-эмбрионального антигена (РЭА), ферритина, накапливающегося при опухолях пищеварительной системы, гликопротеидного антигена (СА-125), сопряженного с опухолями яичников, и мусциноподобного антигена (МЦА), рост которого выявляется при опухолях молочной железы) и гепатопротекторным действием (повышение дезинтоксикационной функции печени). Данные доклинические испытаний препарата показали нормализующее влияние на клеточный иммунитет организма и, в частности, на количество и соотношение Т- и В-лимфоцитов [1, с. 253 — 254].

Е.С. Горшина и А.Г. Скворцов в 2005 г. разработали биологически активную добавку Трамелан (77.99.23.3.У.13183.12.06 от 05.12.2006) на основе нового штамма T. pubescens C-23 (ВКПМ F-839), который характеризуется повышенным синтезом эргостерина. Трамелан обладает гипохолестеринемическим действием.

Результаты клинических данных препарата Трамелан в Институте микробиологии и вирусологии НАН Украины указывают на нормализующее влияние Трамелана на клеточный иммунитет организма человека и способность восстановления до физиологической нормы оксидазсмешанной функции печени [1, с. 253 — 254].

В экспериментах АКЭ прививали в брюшную полость мыши в дозе 0,2 мл суспензии [4, с. 10]. После прививки всех испытуемых мышей поделили на 5 групп, в каждой группе было по 6 мышей:

I – Контрольная – интактные мыши; II – Контрольная – привита АКЭ (без лечения); III – Экспериментальная – привита АКЭ (лечение Траметином); IV – Экспериментальная – привита АКЭ (лечение Арабиногалактаном); V – Экспериментальная – привита АКЭ (лечение Кордицепсом).

Введение препаратов лабораторным животным после прививки опухоли начинали через 6 дней. Дозировки препаратов были выбраны в соответствии с наставлениями для препаратов. Соответственно, дозировка на одну мышь составила: АГ – 1 мл, настойки кордицепса и раствора траметина – по 0,6 мл. Препараты выпаивали перорально с помощью зонда в течение 14 дней, проводили клиническое наблюдение, оценивали продолжительность жизни мышей.

В процессе эксперимента проводилось ежедневное наблюдение за мышами, а именно: за их активностью, общим состоянием здоровья, аппетитом, выживаемостью. Для исследования проводился забор крови у животных наблюдаемых групп. Забор крови проводили через 8 дней после начала лечения для проведения гематологических исследований.

Для получения крови у мышей кончик хвоста опускали в тёплую воду, затем обсушивали марлей и срезали кончик хвоста. После взятия крови рану на хвосте прижигали спиртовым раствором йода [8, с. 55]. Гематологический анализ крови проводили на автоматическом гематологическом анализаторе «Mindrey 5300» (Китай) с использованием реагентов той же фирмы.

Среднеарифметическую величину находили в соответствии с методическим руководством Р.Б. Стрелкова [3, с. 4 – 6].

Результаты исследования. Учёт гибели животных проводили в течение

Таблица 1.

Результаты гематологических исследований

Показатели	Группы
Показатели	Норма	I (интактные)	II (заражённые)	III (Траметин)	IV (АГ)	V (Кордицепс)
Лейкоциты (WBC), 10⁹/л	7.5±0.3	16.36±6,08	7.84±6.75	15.56±11.48	57.4±8.4	8.5±8.2
Нейтрофилы (Neu), %	5 – 40	9.71±4.33	5.76±5.12	12.06±10.38	41.48±2.24	6.2±5.3
Лимфоциты (Lym), %	30 – 90	6.3±1.7	1.45±0.89	2.82±1.03	6.75±1.92	1.59±1.38
Моноциты (Mon), %	0 – 10	0.21±0.14	0.02±0.01	0.3±0.2	0.02±0.01	0.02±0.02
Эозинофилы (Eos), %	0 – 5	0.09±0.02	0.47±0.32	0.36±0.13	9.01±8.62	0.73±0.63
Базофилы (Bas), %	0 – 1	0.09±0.05	0.015±0.004	0.03±0.03	0.15±0.08	0.01±0.01
Эритроциты (RBC), 10¹²/л	7.7±12.5	8.39±0.24	1.78±1.71	7.84±0.45	6.05±0.64	1.54±1.47
Гемоглобин (HGB), г/л	10 – 20	139±4.14	32.3±30.8	133.6±6.7	108±12.07	26±24.89
Гематокрит (HCT), %	35 – 45	58.6±2.3	11.1±10.6	51.46±5.25	49.3±2.5	11.8±11.4
Тромбоциты (PLT), 10⁹/л	–	1273.8±172.1	249±238.05	1218±165.55	977±546.5	302.5±289.3

всего эксперимента. Эффективность препарата оценивали по его влиянию на продолжительность жизни животных. Изменения некоторых гематологических показателей крови представлены в таблице 1.

В таблице приведены показатели нормы крови лабораторных мышей [10, 11, 12]. По результатам гематологического анализа можно заключить, что в I-ой группе (интактная) показатели крови находятся в пределах нормы. В III-ой и IV-ой группе наблюдается воспалительный процесс, т.к. содержание лейкоцитов является повышенным – 15.56-57.4х10⁹/л. Содержание гемоглобина понижено в IV-й и V-ой группах. Настойка кордицепса оказывает значительный лечебный эффект, который проявляется в ослаблении воспалительного процесса. С другой стороны, при введении настойки кордицепса в экспериментальной группе животных отмечается резкое снижение содержания эритроцитов и гемоглобина.

Нами был проведён расчёт средней продолжительности жизни лабораторных животных по методике Першина Г.Н. [7, с. 367]. Согласно выбранной методике, животных фиксировали, определяли срок гибели каждого животного. После гибели всех животных рассчитывали среднюю продолжительность их жизни в контрольной и опытной группах по формуле (%):

где: а – средняя продолжительность жизни мышей в леченой группе, б – средняя продолжительность жизни мышей в контроле.

Средняя продолжительность в группах составила: Траметин (III) – 3,7%; АГ (IV) – 9,1%; Кордицепс (V)– 5,3%.

По результатам расчёта установлено, что лучшая выживаемость отмечается в группе IV.

По результатам работы можно сделать следующие выводы: по гематологическим исследованиям очевидно, что наиболее слабый лечебный эффект оказывает настойка кордицепса; в группе АГ (IV) наблюдали наиболее высокое содержание лейкоцитов, по сравнению с другими группами, что свидетельствует о сильном воспалительном процессе в организме животных (57.4±8.4х10⁹/л); в группе с траметином (III) было отмечено более высокое содержание эритроцитов (7.84±0.45×10¹²/л) и гемоглобина (133.6±6.7 г/л), а также гематокрита и тромбоцитов в крови, по сравнению с другими группами.

Заключение

Из испытанных нами препаратов в дальнейшем при комплексной терапии могут быть использованы препараты траметин и арабиногалактан.

В дальнейшем будет продолжена экспериментальная работа по комплексному лечению животных при использовании иммуномодуляторов и химиотерапевтических препаратов.

Список литературы:

Горшина Е.С. Морфологические и физиолого-биохимические особенности грибов рода Coriolus Quel., продуцентов биологически активных веществ: Современная микология России: тез. докл. I конгр. микологов России. – М., 2002. – С. 253 – 254.
Горшина Е.С., Скворцова М.М., Высоцкий В.Г. Биотехнологический способ производства лекарственного гриба кориола опушенного: Современная микология России: тез. докл. I конгр. микологов России. – М., 2002. – С. 253.
Жаков И.С., Жаков В.М. Методические указания к методу вычисления среднеквадратической ошибки и доверительных интервалов средних арифметических величин с помощью таблицы Р.Б. Стрелкова: Витебск. – 1986. – С. 4 – 6.
Инжеваткин Е.В. Практикум по экспериментальной онкологии на примере асцитной карциномы Эрлиха: Метод. разработка / Сост. Е.В. Инжеваткин. Краснояр. гос. ун-т – Красноярск, 2004. – С. 10.
Калинович А.Е. Эколого-биологическое обоснование применения лечебно-профилактического препарата на основе гриба-ксилотрофа Trametes pubescens (Shumach.: Fr.) Pilat.// Автореф……к.б.н., Иркутск, 2013. – С. 19.
Огарков Б.Н., Огаркова Г.Р., Самусёнок Л.В Лекарственные грибы из экосистем Южного Байкала: монография. – Иркутск: ООО Изд-во «Время странствий», 2012. – С. 34.
Першин Г.Н. Методы экспериментальной химиотерапии (практическое руководство). Издание второе, Изд-во Медицина, М.: – 1971. – С. 367.
Степанов Ю.М. Лабораторные методы диагностики. Исследование крови. Учебно-методическое пособие / Сост. Ю.М. Степанов. Хакасский филиал ФГОУ ВПО «КрасГАУ». – Абакан, 2004. – С. 55.
Чхенкели В.А., Лихошвай Е.В., Малова Т.Н. и др. К вопросу о механизме антимикробного действия ветеринарного препарата траметин: Современные проблемы и перспективы развития АПК: Материалы региональной научно-практической конференции с международным участием, посвященной 80-летию ФГБОУ ВПО ИрГСХА, 25-27 февраля 2014 г., ч. I. – Иркутск: Изд-во ИрГСХА, 2014. – С. 69.
Гематологические показатели. Показатели морфологического состава крови. [Электронный ресурс] – (дата обращения 26.04.2015 г.).
Забор крови у лабораторных млекопитающих и птиц Laboratory Animals, 1993, 27, p.1-22. [Электронный ресурс] – (дата обращения 26.04.2015 г.).
Murphy J.C., Niemi S.M., Hewes K.M., Zink M., Fox J.G. Hematologic and serum protein reference values of Octodon degus Source American journal of veterinary research, 39:4, 1978, Apr. – pg. 713 – 5. [Электронный ресурс] – (дата обращения 26.04.2015 г.).[schema type=»book» name=»ВЛИЯНИЕ ПРИРОДНЫХ ПРЕПАРАТОВ НА ПРОТИВООПУХОЛЕВУЮ АКТИВНОСТЬ НА ПРИМЕРЕ АСЦИТНОЙ КАРЦИНОМЫ ЭРЛИХА» description=»В статье приводятся экспериментальные данные по изучению влияния на организм лабораторных животных природных иммуномодулирующих препаратов: арабиногалактана, спиртовой настойки кордицепса, ветеринарного препарата траметин. Исследовали жизнеспособность лабораторных животных, привитых внутрибрюшинно суспензией клеток асцитной карциномы Эрлиха. В исследовании оценивались следующие показатели: выживаемость животных, картина вскрытия с целью визуального осмотра внутренних органов, результаты гематологических исследований. В дальнейшем планируется изучение влияния комплексной терапии с использованием иммуномодулирующих и химиотерапевтических препаратов.» author=»Костромина Екатерина Олеговна, Чхенкели Вера Александровна» publisher=»БАСАРАНОВИЧ ЕКАТЕРИНА» pubdate=»2017-03-31″ edition=»ЕВРАЗИЙСКИЙ СОЮЗ УЧЕНЫХ_30.04.2015_4(13)» ebook=»yes» ]

euroasia

Похожие записи