ИССЛЕДОВАНИЕ АНТИОКСИДАНТНЫХ СВОЙСТВ МИКРООРГАНИЗМОВ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ ПЕПТИДОВ В ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ

Многочисленные исследования, проводимые во многих странах, посвящены вопросам взаимосвязи канцерогенеза и особенностей питания, наблюдаемых у больных с различными онкологическими заболеваниями. Рак, и химиотерапия, и лучевая терапия нарушают усвоение ряда питательных веществ[1, с.99].

Эубиотики представляют собой лиофильно высушенные живые штаммы определённых бактерий, являющихся представителями микрофлоры здорового человека. При попадании внутрь организма они оживают и активно заселяют тот или иной орган, тем самым нормализуя его микрофлору. Эубиотики делятся на пробиотики, пребиотики и синбиотики [4, с.78].

Убедительно показано, что наличие нормальной микрофлоры, представленной в значительной степени бифидобактериями и лактобациллами, существенно снижает риск возникновения новообразований у человека и животных, что предполагает необходимость широкого использования в повседневной жизни препаратов бифидобактерий и молочных продуктов, содержащих живые бифидобактерии в качестве профилактического средства[3, с. 1-4]. На данный момент ведутся разработки и поиск штаммов, составляющий основу для функционального питания больных. В своих исследованиях проводили анализ антиоксидантных свойств микроорганизмов, выделенных из желудочно-кишечного тракта человека с целью дальнейшего их использования в технологии производства функциональных продуктов питания.

Для определения антиоксидантных свойств рассматриваемых консорциумов исходный раствор β-фикоэритрина готовили растворением 1 мг вещества в 5,6 мл фосфатного буфера (0,2 М, рН 7,0). Исходный раствор хранили в холодильнике. Рабочий раствор готовили путем смешивания 300 мкл исходного раствора с 13,4 мл фосфатного буфера непосредственно перед использованием. Раствор 2,2′-азобис (2-амидинопропан) дигидрохлорида (AAPH) готовили перед началом теста. Для этого 60 мг AAPH взвешивали и растворяли в 5 мл фосфатного буфера. Раствор 6-гидрокси-2,5,7,8- тетраметилхроман-2-карбоновой кислоты (Тролокс) готовили растворением 5 мг вещества в 200 мл 0,2 М фосфатного буфера в качестве основного раствора (100 мкм). Для получения рабочего раствора 1 мл исходного раствора смешивали с 9 мл фосфатного буфера. Исходный раствор хранили при 2°C. Фосфатный буфер получали путем смешивания 0,75M растворов K₂HPO₄ и NaH₂PO₄ в 61,6: 38,9 об / об. Затем смесь разбавляли 1: 9 с дистиллированной водой и рН доводили до 7,0. Рабочий раствор (0,2 М) хранили при 2°С [2, с.125].

Для оценки антиоксидантной активности консорциумов разводили (100×) аликвоты образцов и добавляли контрольный буфер к реакционной смеси, степень защиты от окисления β-фикоэритрином определяли количественно измерением относительной флуоресценции при 595 нм и при 535 нм в течение 70-минутного периода.

В данном методе общая способность поглощения радикалов кислорода (Trolox-эквивалента) прямо пропорциональна площади под кинетической кривой из построенных относительных значений флуоресценции и времени. Чтобы исправить любые отклонения, причиной которых являются приборы, реагенты или какие-либо другие условия анализа, было выражено значение анализируемых образцов со ссылкой на соответствующие суммы и концентрации Trolox и значения были представлены в виде Trolox-эквивалентов (Цао и др., 1995). Все реакции проводили в 48-луночном планшете. В каждую лунку планшета вносили 20 мкл соответствующего образца и 160 мкл рабочего раствора с β-фикоэритрином. Непосредственно перед началом измерений 20 мкл AAPH добавляли в каждую лунку, чтобы инициировать реакцию. Планшет закрывали и помещали в анализатор. В анализе способность соединений по защите β-фикоэритрина от окисления контролировали с помощью кривой распада. Количественное измерение проводилось путем определения чистой защитной зоны в соответствии с кривой распада β-фикоэритрина в присутствии AAPH.

Для вычисления значений способности поглощения радикалов кислорода используется следующее уравнение:

ORAC (способность поглощения радикалов кислорода) = X·K·(S_sample — S_blank) / (S_trolox — S_blank),

где X – объем образца, мкл; K – коэффициент разбавления; S представляет собой площадь под кривой, соответствующей индексу; sample – образец, blank – контроль.

Состав исследуемых консорциумов был определен согласно анализу литературных данных и предыдущим исследованиям и представлен в таблице 1.

Таблица 1 – Составы исследуемых консорциумов микроорганизмов, выделенных из желудочно-кишечного тракта человека

Номер консорциума	Состав консорциума
1	Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium breve, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus paracasei, соотношение микроорганизмов 1:1:1:1:1:1
2	Bifidobacterium breve, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus salivarius, Streptococcus agalactiae, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus casei, соотношение микроорганизмов 1:1:1:1:1:1:1:1
3	Lactobacillus fermentum, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus salivarius, Streptococcus agalactiae, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus paracasei, соотношение микроорганизмов 1:1:1:1:1:1:1
4	Bifidobacteriu longum, Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus salivarius, Streptococcus agalactiae, Bifidobacterium adolescentis, Lactobacillus paracasei, соотношение микроорганизмов 1:1:1:1:1:1
5	Lactobacillus reuteri, Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus salivarius, Streptococcus agalactiae, Enterococcus faecium, соотношение микроорганизмов 1:1:1:1:1:1:1

Рисунок 1. – Результаты определения антиоксидантной активности консорциумов микроорганизмов: 1 – консорциум №1, 2 – консорциум №2, 3 – консорциум №3, 4 – консорциум №4, 5 — консорциум №5

Результаты определения антиоксидантной активности консорциумов микроорганизмов (интактные клетки) приведены на рисунке 1.

Рисунок 1 позволяет сделать вывод о том, что все пять рассматриваемых консорциумов характеризуются выраженными антиоксидантными свойствами (величина тролокс-эквивалента/10⁹ клеток находится в диапазоне от 1246 до 2728). При этом максимальная антиоксидантная активность обнаружена для консорциумов №2 (2728) и №3 (2393).

Список литературы:

1. Антимикробные пептиды млекопитающих: классификация, биологическая роль, перспективы практического применения (обзорная статья) / Жаркова М.С., Орлов Д.С., Кокряков В.Н., Шамова О.В. // Вестник Санкт–Петербургского университета. Серия 3: Биология. – 2014. – № 1. – С. 98–114.
2. Евстигнеева, Е.П. Витамин Е как универсальный антиоксидант и стабилизатор биологических мембран / Е.П. Евстигнеева, И.М. Волков, В.В. Чудинова // Биологические мембраны. – 1998. – Т. 15. – №2. – С. 119–135.
3. Пат. 2308483 Российская Федерация, МПК C12N1/20. Штамм Bifidobacterium longum infantis для приготовления пробиотика, антимикробный агент и препарат на основе штамма Bifidobacterium longum infantis с иммуномодулирующими свойствами / Д. Коллинз, Д. Салливан, Л. Маони и др. ; заявитель и патентообладатель Энтерпрайз Айэлэнд, Нэшнл Юниверсити ов Айэлэнд, Корк. – №2001119046/13 ; заявл. 17.01.2000 ; опубл. 20.10.2007.
4. Трегубова, И.А. Антиоксиданты: современное состояние и перспективы / И.А. Трегубова, В.А. Косолапов, А.А. Спасов // Успехи физиологических наук. – 2012. – Т. 43. – № 1. – С. 75–94.[schema type=»book» name=»ИССЛЕДОВАНИЕ АНТИОКСИДАНТНЫХ СВОЙСТВ МИКРООРГАНИЗМОВ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ ПЕПТИДОВ В ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ» description=»В своих исследованиях проводили анализ антиоксидантных свойств микроорганизмов, выделенных из желудочно-кишечного тракта человека с целью дальнейшего их использования в технологии производства функциональных продуктов питания. Общая антиокислительная активность была измерена методом окисления R-фикоэритрина. В результате исследования были выбраны консорциумы микроорганизмов, обладающих наиболее выраженными антиоксидантными свойствами, которые будут использованы для подержания здоровой микрофлоры у людей с онкозаболеваниями. » author=»Астахова Лидия Анатольевна, Милентьева Ирина Сергеевна, Сухих Станислав Алексеевич» publisher=»БАСАРАНОВИЧ ЕКАТЕРИНА» pubdate=»2017-03-12″ edition=»ЕВРАЗИЙСКИЙ СОЮЗ УЧЕНЫХ_30.05.2015_05(14)» ebook=»yes» ]