Острое токсическое поражение печени (ОТПП) – это большая группа заболеваний, связанных с гепатотоксическим (повреждающим печень) действием различных веществ и факторов, в том числе лекарств, продуктов бытовой химии, профессиональных вредностей, радиации и т.д. В результате такого воздействия возникают изменения ткани печени различной степени выраженности и, следовательно, нарушение нормального функционирования печени. [1,2]. Одним из наиболее общих эффектов, вызываемых поступлением в организм ксенобиотиков, является лабиализация мембран лизосом. Это существенно повышает «просачивание» гидролитических ферментов лизосом в плазму крови.
Целью исследования стало определение фагоцитарной и кислородзависимой активности нейтрофилов периферической крови при использовании ксено-, аллогенных гепатоцитов, фибробластов и их культуральной жидкости в условиях острого токсического поражения печени в эксперименте.
Исследования проведены на 102 крысах-самцах породы Вистар массой 110-180 г. Животных выводили из опыта на шестые сутки после первого введения гепатотропного яда, ксеногенных, аллогенных гепатоцитов (КГ, АГ), фибробластов (ФБ) или их культуральных жидкостей декапитацией под эфирным наркозом.
ОТПП у лабораторных животных моделировали путем внутримышечного введения четыреххлористого углерода (ЧХУ) в дозе 3 мл/кг в виде 50% раствора в оливковом масле пятикратно с интервалом 24 ч[2]. Выделение КГ (мышиных) и АГ от новорожденных животных производилась по стандартной методике M.N. Berry, D.S. Friend.ФБ выделяли из фрагментов туловища и конечностей тканей 8-12-недельного абортуса человека путем их механической дезинтеграции до микрофрагментов размером 0,1-0,2 мм и дальнейшего выращивания по стандартной методике. Жизнеспособность клеток определяли в тесте исключения красителя – трипанового синего, при этом клеточные суспензии, содержащие менее 90% жизнеспособных клеток, не использовали. С целью получения культуральной жидкости КГ (КЖКГ) и АГ (КЖАГ) в среде 199 [5].культивировали 5х107 клеток на 3 мл среды, содержащей 5% телячьей эмбриональной сыворотки, в течение 6 ч. Фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови крыс исследовали после их инкубации с латексом[3,4]. Для оценки фагоцитарной активности клеток использовали фагоцитарный индекс (ФИ) и фагоцитарное число (ФЧ). Для оценки функционального состояния гепатоцитов в плазме крови определяли активность аспартат- и аланинаминотрансфераз (АСТ, АЛТ), щелочной фосфатазы (ЩФ), гаммаглутаминтранспептидазы (ГГТ), содержание билирубина (БР), протромбиновый индекс (ПТИ) и тимоловую пробу (ТП). Концентрацию фибриногена (ФГ) исследовали методом Рутберг. Величины всех перечисленных показателей определяли унифицированными методами с использованием стандартных наборов реактивов[6].Статистическую обработку результатов исследования проводили по общепринятым критериям вариационно-статистического анализа с вычислением средних величин (M), ошибки средней арифметической (m) с помощью пакета компьютерных программ MicrosoftExcel, 2010.
При ОТПП установлено повышение всех показателей фагоцитарной и кислородзависимой активности нейтрофилов периферической крови.В группе животных с ОТПП, получавших КГ, наблюдалась нормализация кислородзависимой активности гранулоцитов. При трансплантации отравленным ЧХУ крысам АГ количество измененных показателей с III СЛР снижалось до 55,6%.В группе животных, получавших КЖАГ, не было ни одного показателя, отличающегося от нормы (таб. 1).
Таблица 1.
Анализ влияние культуральной жидкости ксено-, аллогенных гепатоцитов и фибробластов на показатели метаболизма в условиях острого токсического поражения печени
| Условия опыта | Измененные лабораторные показатели |
Измененные лабораторные |
||||||
| I | II | III | ||||||
| абс. | % | абс. | % | абс. | % | абс. | % | |
| Отравление ЧХУ | 9 | 100 | 3 | 33,3 | 5 | 55,6 | 1 | 11,1 |
| Отравление ЧХУ и введение КГ | 8 | 88,8 | 1 | 11,1 | 3 | 33,3 | 4 | 44,4 |
| Отравление ЧХУ и введение ФБ | 8 | 88,8 | 3 | 33,3 | 1 | 11,1 | 4 | 44,4 |
| Отравление ЧХУ и введение АГ | 5 | 55,6 | — | — | — | — | 5 | 55,6 |
| Отравление ЧХУ и введение КЖКГ | 5 | 55,5 | 1 | 11,1 | — | — | 4 | 44,4 |
| Отравление ЧХУ и введение КЖФБ | 7 | 77,8 | 1 | 11,1 | 1 | 11,1 | 5 | 55,6 |
| Отравление ЧХУ и введение КЖАГ | — | — | — | — | — | — | — | — |
Таким образом, клеточные суспензии оказывают гораздо менее выраженные модулирующие эффекты на фагоцитарную и кислородзависимую активность нейтрофилов периферической крови, чем субстрат, полученный при их культивировании [7].Максимальной эффективностью в коррекции нарушений обладают КЖАГ и АГ, средние по выраженности эффекты выявлены у КЖКГ и КГ, а минимальные у КЖФБ и ФБ. Для эффективной коррекции нарушений фагоцитарной и кислородзависимой активности нейтрофилов периферической крови наиболее эффективно применение культуральной жидкости аллогенных гепатоцитов, что можно использовать для разработки лекарственных средств на основе субстрата, полученного при культивировании аллогенных гепатоцитов.
Список литературы:
- Абакумова О.Ю., Куценко Н.Г., Федорова Л.М., Подобед О.В., Гаврильчак А.В., Шехман. А.Б., Ковалева Г.Г., Полпов А.А., Ли В.С., Карагюлян С.Р., Митина В.Х., Клящицкий Б.А. Стимуляция процессов регенерации и коррекция функциональной активности печени при ее частичной резекции и токсических поражениях // Вести Российской Академии наук. – 1996. — № 5. – С. 36-41.
- Алексеева И.Н., Брызгина Т.М. Печень и иммунологическая реактивность. Киев. – 1991. – С 168.
- Бурда Ю.Е. Влияние супернатанта аллогенных фибробластов на функциональную активность нейтрофилов и продукцию интерлейкина-8 invitro // Мед.иммунология . – 2003. – Т. 5, № 3-4. – С. 247-248.
- Бурда Ю.Е., Конопля А.И., Ершов Д.В. Влияние комплекса гуморальных факторов, продуцируемых фибробластами, на адгезивную способность клеток-участниц воспаления invitro. Современные наукоемкие технологии. 2005.– № 4. – С. 86.
- Быстрова Н.А., Терехова С.В., Литвинова Е.С., Чуева Т.В. Иммунометаболические нарушения у животных на фоне ишемического поражения печени: коррекция аллогенными гепатоцитами // Современные проблемы науки и образования. – 2012. – № 6. – С 7.
- Долгушин И.И., Савочкинга А.Ю. Секреторные функции нейтрофилов // Аллергология и иммунология. – 2015. – Т.16, № 2. – С. 210-212.
- Дудка В.Т., Конопля А.И., Чуева Т.И., Польской В.С., Литвинова Е.С., Михайлова А.И., Кузьмицкая О.И., Гаврилюк В.П. Иммунная реактивность, функционально-метаболическая активность нейтрофилов и гепатоцитов при воздействии постоянного магнитного поля в условиях токсического поражения печени // Международный журнал по иммунореабилитации. – 2010. – Т. 12, № 2. – С. 233.[schema type=»book» name=»КОРРЕКЦИЯ НАРУШЕНИЙ ФАГОЦИТАРНОЙ И КИСЛОРОДЗАВИСИМОЙ АКТИВНОСТИ НЕЙТРОФИЛОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ПРИ ОСТРОМ ТЕТРАХЛОРМЕТАНОВОМ ПОРАЖЕНИИ ПЕЧЕНИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ» description=»Цель: определение фагоцитарной и кислородзависимой активности нейтрофилов периферической крови при использовании ксено-, аллогенных гепатоцитов, фибробластов и их культуральной жидкости в условиях острого токсического поражения печени в эксперименте. Материал и методы исследования. Исследования проведены на 96 половозрелых крысах-самцах Вистар массой 120-160 г. Острую интоксикацию ЧХУ (четыреххлористым углеродом) проводили путем его внутримышечного введения в дозе 3 мл/кг в виде 50% раствора в оливковом масле пятикратно с интервалом 24 ч. Культуральные жидкости аллогенных или ксеногенных гепатоцитов и фибробластов готовили культивированием в среде 199 соответствующих клеток, полученных по методу M.N.Berry, D.S. Friend, и вводили отравленным ЧХУ реципиентам внутрибрюшинно, пятикратно, одновременно с токсикантом. Результаты: При ОТПП (остром токсическом поражение печени) установлено повышение всех показателей фагоцитарной и кислородзависимой активности нейтрофилов периферической крови. В группе животных с ОТПП, получавших КГ, наблюдалась нормализация кислородзависимой активности гранулоцитов. При трансплантации отравленным ЧХУ крысам АГ количество измененных показателей снижалось. В группе животных, получавших КЖАГ, не было ни одного показателя, отличающегося от нормы. Выводы: Для эффективной коррекции нарушений фагоцитарной и кислородзависимой активности нейтрофилов периферической крови наиболее эффективно применение культуральной жидкости аллогенных гепатоцитов, что можно использовать для разработки лекарственных средств на основе субстрата, полученного при культивировании аллогенных гепатоцитов.» author=»Литвинова Екатерина Сергеевна, Разумова Марина Сергеевна, Михайлова Алевтина Игоревна, Кузмицкая Олеся Николаевна» publisher=»БАСАРАНОВИЧ ЕКАТЕРИНА» pubdate=»2017-01-30″ edition=»ЕВРАЗИЙСКИЙ СОЮЗ УЧЕНЫХ_31.10.15_10(19)» ebook=»yes» ]