30 Апр

Полиморфизмы генов системы гемостаза у больных гемофилией




Номер части:
Оглавление
Содержание
Журнал
Выходные данные


Науки и перечень статей вошедших в журнал:

Введение. В настоящее время генная диагностика системы гемостаза все шире и шире используется для обследования пациентов с целью выявления факторов риска развития заболеваний и выработки тактики их профилактики [1].  Генетический полиморфизм в системе гемостаза не всегда имеет клинические проявления, в то же время продемонстрирована связь эпизодов венозного тромбоза с носительством врожденных факторов тромбогенного риска[2,3,4]. Отмечается, что мутации и полиморфизмы в системе гемостаза, ассоциирующиеся с повышенным риском возникновения тромбозов, встречаются у больных гемофилией с большей частотой по сравнению с общей популяцией [1].

Целью данного исследования являлось изучение распространенности полиморфизмов системы гемостаза как фактора тромбогенного риска в данной группе больных.

Материалы и методы.  В исследовании приняли участие 48 пациентов, их них больных  гемофилией А — 29 мужчин,  17 мужчин больных гемофилией В, 1 женщина больная гемофилией В, 1 женщина больная гемофилией С. Все больные состояли на диспансерном учете в поликлинике КГБУЗ «Алтайская краевая клиническая больница». Большинство больных страдали гемофилией тяжелой степени тяжести (73%), также встречались больные с легкой (11%) и средней (16%) степенью тяжести.   Средний  возраст больных  составил   34,7 ± 6,7 года.

Всем больным гемофилией было проведено молекулярно-генетическое  тестирование  на выявление мутаций в генах системы гемостаза и системы фолатного цикла, которое  выполнялось  методом  ПЦР  и  включало исследование  полиморфизмов    генов: фактора V (мутация FVLeiden G1691A), протромбина – FII(G20210 /A), метилентетрагидрофолатредуктазы  – MTHFR (C677/T; A1298/C), метионин-синтазы редуктазы MTRR (A66/G), ингибитора  активатора плазминогена — PAI-I (4G/5G), ITGA 2-гликопротеин (807 С/T), ITGB 3 –гликопротеин (1565 T/С), фактора I FGB (455G/A), фактора свертывания VII (10976 G/A), гена F13 (Val34Leu). Исследование проводилось на базе лаборатории клинической иммунологии и ВИЧ КГБУЗ «Алтайская краевая клиническая больница». Выделение ДНК производилось с помощью «ПРОБА-РАПИД-ГЕНЕТИКА», для амплификации использовались наборы реагентов «КардиоГенетика Тромбофилия» и «Генетика Метаболизма Фолатов», производство ООО «НПО ДНК- Технология», Россия. Исследования проводились на детектирующем амплификаторе «ДТ-96», (ООО «НПО ДНК- Технология», Россия), методом «кривых плавления».

Результаты и обсуждение. Данные о распространенности изучаемых генетических полиморфизмов в группе обследованных пациентов представлены в таблице 1.

Таблица 1.

Полиморфизмы системы гемостаза у больных гемофилией

Тип  полиморфизма системы гемостаза Частота встречаемости полиморфизма у больных гемофилией Частота встречаемости полиморфизма  в европейской популяции
в гетерозиготном варианте в гомозиготном варианте     Общая
Мутация FII гена протромбина 0 0 0 2-3%
мутация FV Leiden 3 (6,25%) 0 6,25% 4-6%
MTHFR (C677/T; A1298/C) 20 (41,7%) 11 (22,9%) 64,6% 60-75%
MTRR (A66/G) 15 (31,25%) 7 (14,6%) 45,75% 40-50%
PAI-I (4G/5G) 16 (33,3%) 18 (37,5%) 70,8% 50-70%  (4G/4G – 5-8%)
ITGA 2-гликопротеин (807 С/T) 22 (45,8%) 8 (16,7%) 62,5% 20-40%
ITGB 3 –гликопротеин (1565 T/С) 9 (18,75%) 2(4,2%) 22,95% 10-20%
ген фибриногена FGB (455G/A) 18 (37,5%) 0 37,5% 5-20%
фактора свертывания VII (10976 G/A) 6 (12,5%) 0 12,5% 10-20%
ген F13 16 (33,3%) 0 33,3% 15-25%

Мутация  G1691A  (Лейденская) в гене  V  фактора  свертывания  крови.  Носители обладают повышенной склонностью к  развитию  сосудистых  тромбозов,  являющихся  фактором  риска  венозных  и  артериальных тромбоэмболий,  инфаркта  миокарда  и  инсульта.  Гетерозиготными  носителями  Лейденской мутации  являются  4–6  %  европейского  населения,  причем  риск  тромбообразования увеличивается в 3–7 раз при гетерозиготном и в 80 раз при гомозиготном носительств. В изучаемой группе гетерозиготное состояние гена F5 1691  G/ A выявлено у 3 пациентов (6,25%), гомозиготное носительство не обнаружено.

Мутация фактора II G20210A. Мутация связана с увеличением уровня протромбина в плазме, который может быть в 1,5–2,0 раза выше, чем в   норме. Это   приводит   к   пожизненному   состоянию   гиперкоагуляции,   что   связано примерно с 3-4-кратным увеличением риска развития венозного тромбоза [7]. Мутация гена протромбина у больных гемофилией, проживающих в Алтайском крае, обнаружена не была, хотя ее  встречаемость в европейской популяции составляет 2-3%.

Полиморфизм  5G(-675)4G в гене  SERPINE1(PAI-1).  Гомозиготная  мутация  4G/4G полиморфизма  –  675  4G/5G  является  фактором  риска  для  развития  тромбозов, инфаркта миокарда [6]. Распространенность  гомозиготной  формы  4G/4G  в европейских  популяциях  составляет  5–8 %.  В данном исследовании дефект в гене PAI-1 выявлен у 34 больных (70,8%), причем гомозиготный мутантный генотип 4G/4G, ассоциированный с наибольшим риском тромбообразования, встречался у 18 (37,5%) больных.

Полиморфизм MTHFR Ala222Val (-677С>Т).  Полиморфизм  MTHFR широко распространен в европейской популяции, гетерозиготными носителями, по некоторым данным  являются 60% европейцев, гомозиготными – 4-15%. У лиц гомозиготных   по данной мутации (генотип Т/Т) отмечается термолабильность MTHFR и снижение активности     фермента примерно до 35% от среднего значения, что почти в 10 раз повышает риск развития гипергомоцистеинемии, что может привести к повышенному риску тромбообразования.  В проведенном наблюдении данный полиморфизм встретился у 31 (64,6%) больного, гомозиготный вариант в 11(22,9%) случаях.

Полиморфизм гена MTRR A66G  изменяет биохимические свойства фермента метионин-синтазы редуктазы, в котором происходит замена аминокислоты изолейцин на метионин. В результате этой замены функциональная активность фермента снижается, что приводит к гипергомоцистеинемии, что может привести к повышенному риску тромбообразования. У обследуемых больных гемофилией мутантный G аллель встретился в 45,8% случаев, что сопоставимо с европейской популяцией (40-50%).

Полиморфизм G10976A в гене VII фактора свертывания крови способствует   снижению  активности  F7  и уменьшению тромбообразования. Генотип А/А является причиной снижения активности фермента F7 на 72 %, по сравнению с диким типом (генотип G/G). Гетерозиготное носительство данного дефекта выявлено 6 (12,5%) больных гемофилией, что сопоставимо с распространенностью в европейских популяциях (10-20%). Гомозиготный  мутантный  генотип  А/А,  ассоциированный  со  снижением  риска тромбообразования,  не встречался  в  группе  исследованных больных.

Полиморфизм G455A в гене фибриногена. Данный  полиморфизм сопровождается  повышенной  экспрессией  гена фибриногена,  что  приводит  к  увеличению  содержания фибриногена  в  крови  и  повышает  вероятность  образования  тромбов,  что  способствует увеличению  риска тромбоза. При сопоставлении  частот  отдельных  генотипов  установлено,  что  в  группе  больных гемофилией чаще отмечено  гетерозиготное  носительство (генотип G/A) – у 18 (37,5%) больных по сравнению с европейской популяцией (5-20%). Гомозиготный  мутантный  аллель  А/А   ни  у кого из обследованных не выявлен.

Полиморфизм С807Т в гене ITGA2. Наличие Т-аллеля ассоциируется с увеличением скорости адгезии тромбоцитов, что  может являться фактором  риска  тромбофилии. В европейской популяций данный аллель встречается в 20-40% случаев, в то время как в группе исследуемых больных гемофилией T-аллель встретился у 30 (62,5%)больных, в т.ч. в гомозиготном варианте у 8(16,7%) больных, в гетерозиготном варианте у 22(45,8%) больных.

Полиморфизм  Т1565С в  гене ITGВ3. Тромбоциты носителей С аллеля  имеют  повышенную  склонность  к  агрегации, что может являться увеличением риска тромбообразования, приводящего к сердечно-сосудистой патологии. При  сопоставлении  частот  отдельных  генотипов установлено, что гомозиготное носительство «мутантного» генотипа СС отмечается у 2(4,5%) больных  гемофилией, в  то  же  время  «мутантный»  гетерозиготный  аллель  С/Т встречался у 9 (18,75%) больных, тогда как в европейской популяции встречаемость аллеля С не превышает 20%.

Полиморфизм Val34Leu А-субъединицы фактора XIII . С помощью электронной микроскопии было показано, что для варианта фактора XIII, содержащего 34Leu, характерно образование более тонких фибриновых волокон и менее пористая структура сгустка, чем в случае «нормального» варианта Val/Val, что может привести к гипокоагуляции [5]. Частота встречаемости мутантного аллеля в европейской популяции составляет 15-25%, в то время как у исследуемых больных гемофилией данный аллель встретился у 16 (33,3%) больных.

Важным результатом является выявление большого числа сочетанных форм полиморфизмов исследуемых генов. Во всех случаях отмечается сочетание не менее 3-х полиморфизмов у каждого больного. У 12 больных сочетаются 5 и более полиморфизмов. Ни у одного из пациентов не выявлено изолированного дефекта исследуемых генов.

Таблица 2.

Сочетания полиморфизмов системы гемостаза у больных гемофилией.

Количество полиморфизмов Количество больных
1 2 (4%)
2 4 (8%)
3 7 (14,3%)
4 9 (18,4%)
5 и более 26 (53,1%)

На наш взгляд, обнаруженные у наших больных сочетания тромбогенных полиморфизмов значительно увеличивают предрасположенность к тромботическим состояниям.

Выводы. У больных гемофилией в Алтайском крае обнаружена высокая частота сочетанных форм мутаций и полиморфизмов в генах системы гемостаза, что повышает тромбогенный потенциал системы крови.

Список литературы:

  1. Буевич Е.И., Котовщикова Е.Ф., Богданова И.В. Особенности сосудисто-тромбоцитарных нарушений и генетический полиморфизм системы гемостаза у больных гемофилией с мезенхимальной дисплазией//Вестник Алтайской науки. — №1(4). — 2009. — с. 7-15
  2. Залуцкий И. В., Машевский А. А., Смолякова Р. М. Молекуляно-генетические аспекты патогенеза венозных тромбозов и тромбоэмболии легочной артерии// //Онкологический журнал. — 2007. — №2(2). — с.1-18
  3. Момот А.П., Строзенко Л.А., Цывкина Л.П и др. Первичная тромбопрофилактика у детей Алтайского края на основе выявления и модификации постоянных и временных факторов тромбогенного риска. — Барнаул: Изд-во АГМУ, 2013. — 83 с.
  4. Шевела А. И., Егоров К. С., Севастьянова К. С., Новикова Я. В. Флеботромбоз и врожденная тромбофилия/ //Ангиология и сосудистая хирургия. — 2011. — №5. — с.95-99
  5. Arins RA, Philipou H,Nagaswami C at al. The factor XIII V34L polymorphism accelerates thrombin activation of factor XIII and affects cross-linked fibrin structure.//Blood. — 2000. — Vol.96(3). — P.988-95
  6. Pastinen T, Perola M, Niini P at al. Array-based multiplex analysis of candidate genes reveals two independent and additive genetic risk factors for myocardial infarction in the Finnish population//Hum Mol Genet. — 1998. — Vol. 7(9). — P.1453-62
  7. Rosendaal FR, Doggen CJ, Zivelin A, et al. Geografic distribution of the 20210 G to A protrombin variant//Thromb Haemost. — 1998. — Vol.79. — P.706-708.
    Полиморфизмы генов системы гемостаза у больных гемофилией
    Written by: Копылов Андрей Николаевич, Елыкомов Валерий Анатольевич, Гридчина Анна Владимировна
    Published by: БАСАРАНОВИЧ ЕКАТЕРИНА
    Date Published: 04/03/2017
    Edition: ЕВРАЗИЙСКИЙ СОЮЗ УЧЕНЫХ_30.04.2015_04(13)
    Available in: Ebook