26 Мар

ИДЕНТИФИКАЦИЯ МИКОБАКТЕРИЙ, ВЫДЕЛЕННЫХ ОТ БОЛЬНЫХ ЛЕПРОЙ




Номер части:
Оглавление
Содержание
Журнал
Выходные данные


Науки и перечень статей вошедших в журнал:

Лепра – хроническое инфекционное заболевание, вызываемое патогенной для человека Mycobacterium leprae, способной поражать кожу и периферические нервы и остается одним из немногих патогенов, некультивируемых на питательных средах. В настоящее время для подтверждения диагноза лепры используют клинический осмотр, гистологические и бактериоскопические методы. Учитывая тот факт, что в возникновении и развитии лепры основную роль играют нарушения клеточного иммунитета, можно предположить, что помимо M.leprae на коже больных лепрой могут персистировать и другие микобактерии. В настоящее время во всем мире отмечается рост заболеваемости микобактериозами, наиболее высокий риск развития которых наблюдается у лиц с иммунодефицитами [3]. Род Mycobacterium состоит из нескольких групп микобактерий, среди которых, кроме безусловных патогенов человека, таких как M.leprae, M.ulcerans и M.tuberculosis complex, существует целый ряд условно-патогенных микобактерий. Поэтому целью исследования явилась идентификация микобактерий, выделенных с кожи больных лепрой.

Материалы и методы.

Исследовано 79 образцов: 16 биопсий, 43 скарификата кожи от больных лепрой и 20 скарификатов от здоровых лиц. Экстракцию ДНК проводили автоматическим методом с использованием набора реагентов (GXT DNA/RNA GenoExtraction Kit) на станции GenoXtract («HainLifescience», Германия). Принцип выделения заключается в связывание микобактерий с магнитными частицами, происходит лизис и осаждение ДНК на частицах, с последующей сепаратной обработкой остатков клеток, отмывкой и переносом образцов в пробирки. Полимеразно-цепную реакцию (ПЦР) проводили на термоциклерах «Терцик» (НПФ «ДНК-технология», Россия). Амплификация ДНК осуществлялась с использованием комплектов реагентов и праймеров фирмы «HainLifescience» (Германия), основанный на DNA-STRIP технологии: 1. Набор «GenoType Leprae DR», позволяющий молекулярно-генетически идентифицировать M.leprae и ее устойчивость к рифампицину, офлоксацину, дапсону; 2. Набор «GenoType Mycobacterium CM (CommonMycobacteria), выявляющий 14 видов микобактерий, таких как: M.avium ssp., M.chelonae, M.abscessus, M.fortuitum, M.gordonae, M.marinum/M.ulcerans, M.intracellulare, M.scrofulaceum, M.interjectum, M.kansasii, M.malmoense, M.peregrinum, M.xenopi и комплекс M.tuberculosis и 3. Набор «GenoType Mycobacterium AS», обеспечивающий идентификацию 16 видов редко встречающихся микобактерий: M.simiae, M.mucogenicum, M.goodi, M.celatum, M.smegmatis, M.genavense, M.lentiflavum, M.heckeshornense, M.szulgai/M.intermedium, M.phlei, M.haemophilum, M.kansasii, M.ulcerans, M.gastri, M.asiaticum и M.shimoidei. В зависимости от выбранных праймеров применяли от 30 до 50 циклов амплификации. Гибридизацию амплифицированной ДНК выполняли на автоматическом приборе «GT-Blot-48» («HainLifescience», Германия). Учет результатов осуществлялся визуально с помощью прилагаемого к каждому набору шаблона и в автоматическом сканирующем устройстве «GenoScan» («HainLifescience», Германия).

Результаты исследования.

При использовании праймеров «GenoType LepraeDR» M.leprae идентифицировалась во всех биопсиях, что подтверждалось бактериоскопическими и гистологическими методами. Кроме того, в 4,7% случаев бактериоскопически негативных образцов скарификатов кожи от больных лепрой M.leprae обнаруживалась с помощью ПЦР. В скарификатах кожи от здоровых лиц M.leprae не выявлялись ни в одном случае. При использовании праймеров «GenoType Mycobacterium CM» в 3 биопсиях от больных лепрой (18,8%) обнаруживались M.malmoense и в одном случае (6,3%) M.avium. В скарификатах кожи от больных лепрой и здоровых лиц ни один из 14 определяемых набором видов микобактерий не определялся. Таким образом, в результате проведенного исследования установлено, что у больных лепрой, преимущественно в биопсиях, выявляются, помимо M.leprae, и другие микобактерии, в частности M.malmoense и M.avium.

Атипичные микобактерии попадают на кожу человека из природных источников, в том числе из почвы, воды, пыли [2]. Микобактерии часто обнаруживаются у животных, однако передача их от животного к человеку не доказана. Нет доказательств передачи атипичных микобактерий от человека к человеку. При обследовании населения Астраханской области Л.А. Винник показал, что на сенситины из M.scrofulaceum реагировали 39% населения области, M.battey – 32%, M.avium – 23%, M.kansasii – 3,6% и M.marinum – 2,4% [1].  В работе J.I. Salem, P.G. Filho и др. [4] при исследовании смывов рук 290 здоровых лиц, проживающих в Бразилии, и 36 биопсий от больных лепрой показано, что M.avium-intacellulare обнаруживалась в 11,1% биопсий от больных лепрой и в 7,8% случаев у здоровых. Большинство атипичных микобактерий маловирулентны для человека. У лиц с нормальным иммунитетом заболевание развивается только при массивном заражении или при попадании возбудителя непосредственно в поврежденные ткани. Наличие у больных лепрой, сопутствующей микобактериальной флоры может способствовать диссеминированию процесса на коже.

Таким образом, применение молекулярно-генетических методов для идентификации микобактерий показало высокую чувствительность обнаружения возбудителя лепры по сравнению со стандартными бактериоскопическими методами,

Список литературы

  1. Винник, Л.А. Туберкулез и лепра: две тени прошлого? / Л. А. Винник. – Астрахань. 1997. – 128 с.
  2. Katoch, V. Infections due to non-tuberculous mycobacteria (NTM) / V. Katoch // Ind. J. Med. Res. – 2004. – Vol. 120. – P. 290-304.
  3. Richter, E. Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis infection in a patient with HIV, Germany / E. Richter, J. Wessling, N. Lugering // Emerg. Infect. Dis. – 2002. –Vol. 8. – P. 729-731.
  4. Salem, J.I. Isolation and characterization of mycobacteria colonizing the healthy skin / J.I. Salem, P.G. Filho, V. Levy-Frebault et al. // Acta Lepr. – 1989. – Vol. 7. – P. 18-20.
    ИДЕНТИФИКАЦИЯ МИКОБАКТЕРИЙ, ВЫДЕЛЕННЫХ ОТ БОЛЬНЫХ ЛЕПРОЙ
    Представлены результаты идентификации микобактерий, выделенных с поверхности кожи больных лепрой. Установлено, что у больных лепрой на коже выявляются, помимо M.leprae, и другие микобактерии, в частности, M.malmoense и M.avium.
    Written by: Арнаудова Кристина Шотаевна, Сароянц Людмила Валентиновна
    Published by: БАСАРАНОВИЧ ЕКАТЕРИНА
    Date Published: 12/23/2016
    Edition: euroasian-science.ru_25-26.03.2016_3(24)
    Available in: Ebook