30 Ноя

ФЛУКТУАЦИИ БЕЛКОВ СВЕРТЫВАЮЩЕЙ СИСТЕМЫ ПЛАЗМЫ КРОВИ ПРИ РАЗБАВЛЕНИИ ВОДОЙ И ФИЗРАСТВОРОМ




Номер части:
Оглавление
Содержание
Журнал
Выходные данные


Науки и перечень статей вошедших в журнал:

Флуктуации активности ферментов, конформаций белковых молекул связаны с разными факторами, в том числе состоянием растворителя – воды [2], физраствора и др. В данной работе исследовали флуктуации времени свертывания плазмы крови.

Методика. Кровь забирали из вены в пробирки с цитратом натрия (на станции переливания крови) от лиц 18-35 лет. Получали центрифугированием обедненную тромбоцитами плазму. К 0,1 мл плазмы добавляли 0,2 мл хлористого кальция и измеряли время появления сгустка («время рекальцификации»).

Результаты. При разбавлении плазмы крови в 2 раза физраствором показатели времени свертывания  (количество  повторных  замеров  /n/  от  40 до 143) приобретают тенденцию к стабилизации (среднеквадратическое отклонение /d/снижается с 13,9±4,7 до 9,0±1,1%; Р<0,1). (Таблица1) В одной из серий (n=143) до разбавления показатели свертывания варьировали со среднеквадратическим отклонением 21%; в той же плазме, разбавленной в 2 и 4 раза дистиллированной водой коэффициент вариативности снизился с 21% до 5% и 3%, соответственно. (Рис. 1) Тот же образец плазмы (не разбавленный водой), сохраненный трое суток, утратил флуктуационную активность. (Рис. 1)

[В данном аспекте интересно решение параллельной проблемы. При оценке титра антител к лекарственным препаратам методом реакции связывания комплемента использовали свежую сыворотку человека. Получаемые результаты постоянно варьировали в одной и той же пробе крови больного; не удавалось определить истинный титр анти- тел. Исходя из опыта работы выход был найден быстро – пробы (после внесения сыворотки крови в буфер) начали оставлять на ночь и лишь затем продолжали методику замера. Флуктуации прекратились. [1,3] ]

Таблица 1

Изменение коэффициента вариации времени свертывания (рекальцификации; в секундах) после разбавления плазмы

Серии опытов (количество экспери-мен- тов) Неразбавленная плазма (контроль) Разбавленная в 2 раза Разбавленная в 4 раза
n d% M±m,

сек.

n d% M±m,

сек.

n d% M±m,

сек.

1 20 5 180±2 20 3* 170±1
2 30 6 183±2 37 3* 171±1
3 21 15 372±12 21 9* 424±8 20 8* 560±10
4

(см. рис. 1)

71 21 209±10 37 5* 183±2 37 3* 171±1
5 21 7 131±2 21 7 123±2 20 10 152±3
6 22 6 147±2 21 8 142±3 21 8 159±3
7 20 8 175±3 19 10 172±4 17 18* 192±8
8 20 9 198±4 21 14 257±8 20 14 357±11
9 20 11 164±4 20 10 153±3 15 22* 185±10
Итого для 7 серий  

160

М ср. 13,9±4,7 9,0±1,1 11,8±2,5
Р <0,1 >0,5
Итого для 9 серий  

М ср. 12,0±3,7 9,9±2,3
Р >0,5

Примечание: * – Р<0,025 по критерию Фишера.

n – Количество замеров всемени выпадения сгустка. [Плазму 20- 150 раз забрали в отдельную пробирку по 0,1 млиз общей емкости, добавляли 0,2 млраствора хлорида кальция (для восстановления содержания ионов кальция, без которых свертывание не происходит), что запускало каскад свертывающей системы.]


Рис.1. Флуктуации времени свертывания плазмы крови в секундах.

Точками снизу вверх обозначены последовательно получаемые инварианты замеров. Нижние графики – суммарное распределение инвариант. При разбавлении плазмы в 2 и 4 раза остался ведущий (наиболее вероятностный) пик значений (в диапазоне 170-190 секунд).Рис.1. Флуктуации времени свертывания плазмы крови в секундах.

Методической ошибкой (мерой неаккуратности) проводимых исследований (по определению времени рекальцификации) можно считать минимальный разброс, соответствующий среднеквадратическому отклонению в 3%. То есть флуктуации не случайны.

Таким образом, разбавление плазмы может привести как к снижению (серии 1-4), так и увеличению (в сериях 7 и 9 таблицы) разброса флуктуаций. Торможение во времени свертывания плазмы после ее разбавления (в сериях 3 и 8), возможно, связано со снижением концентрации факторов коагуляционного гемостаза (низким содержанием белков у данных доноров). На таких пробах крови, предположительно, можно изучать гетерогенные структуры (трубчатые, сферические, плоскостные) в аспекте структуризации жидкости [данный методический подход сложен, но реален]. Сокращение времени свертывания (в сериях 1, 2, 4) после разбавления указывает, вероятнее, на постепенную активацию факторов контактными поверхностями в процессе эксперимента.

[20-летняя работа с кровью показала, что с годами найти донора с хорошим разбросом данных все труднее. Для этого нам приходилось    просить сдать кровь студента местной национальности, здорового, молодого по возрасту. (Грубо выражаясь, природа постепенно умирает; разбросов все меньше. Если раньше на реках весной лед трескался и шел ледокол, то сейчас постепенно тает без синхронизации процесса.) То есть исчезает кооперативность (quorum sensing /чувство локтя/) – согласованность в работе флуктуирующих молекул. Если каждая молекула флуктуирует сама по себе, то в итоге должны получаться среднестатистические – одни и те же значения.]

Список литературы:

  1. Говорин Н.В., Ложкина А.Н. Антитела к нейролептическим препаратам и их место в меха- низмах терапевтической резистентности при пара- ноидной шизофрении / / Ж. невропатол. и психиат- рии им. Корсакова. – 1991. — N 7. — С. 117-121.
  2. Захаров С. Д., Зюзин М. В., Мосягина И. В. Вода: микроструктура и флуктуации // http://www.biophys.ru/archive/h2o-00027.pdf
  3. Ложкина А.Н., Говорин Н.В. Определение антител к нейролептическим препаратам реакцией поглощения компле- мента в сыворотке крови больных шизофренией // Лабораторное дело. – 1991. — № 10. – C. 78.
    ФЛУКТУАЦИИ БЕЛКОВ СВЕРТЫВАЮЩЕЙ СИСТЕМЫ ПЛАЗМЫ КРОВИ ПРИ РАЗБАВЛЕНИИ ВОДОЙ И ФИЗРАСТВОРОМ
    Исследовали флуктуации коагуляционной активности плазмы крови. Замеряли время свертывания (рекальцификации) цитратной плазмы доноров без разведения физраствором или дистиллированной водой (i), после разведения в 2 (ii) и 4 (iii) раза. Измерения повторялись 20-100 раз. Флуктуации времени сверты- вания плазмы крови после разбавления дистиллированной водой резко снижались; после разведения физраствором данные неоднозначны. Требуются дополнительные эксперименты.
    Written by: Ложкина Анна Николаевна
    Published by: БАСАРАНОВИЧ ЕКАТЕРИНА
    Date Published: 01/11/2017
    Edition: ЕВРАЗИЙСКИЙ СОЮЗ УЧЕНЫХ_30.11.16_32(1)
    Available in: Ebook